花生油和粮谷中黄曲霉毒素的检测——UPLC-MS/MS法
- 发布时间：2016/9/21 16:52:16
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黄曲霉毒素包括B1、B2、G1、G2、M1、M2等多种形式，但是目前有关这些毒素的检测方法很少，且以酶联免疫(ELISA)法和薄层色谱(TLC)法等筛选方法检测黄曲霉毒素B1为主；液相色谱法(HPLC)容易受到杂质干扰，而且检出限很难达到要求。液相色谱-串联质谱(HPLC-MS/MS)是一种集分离和多组分定性、定量于一体的系统，已成为近年来研究黄曲霉毒素检测的主要方向，并已经应用到黄曲霉毒素的污染检测中。
方法优势：
迪马科技开发的《花生油和粮谷中黄曲霉毒素的检测-UPLC-MS/MS法》采用固相萃取-UPLC-MS/MS法，可同时检测5种黄曲霉毒素，并能够达到准确定性定量，检出限是0.5 μg/kg，远低于国家标准《GB 2761-2011 食品安全国家标准 食品中真菌毒素*》；对比国标方法《GB/T 18979-2003 食品中黄曲霉毒素的测定 免疫亲和层析净化液相色谱法和荧光光度法》，本方案具有：
前处理步骤简单、回收率高、方法稳定性好、净化效果优异等特点；
避免了免疫亲和柱容易受环境影响而引起黄曲霉毒素回收率低和净化效果不好的弊端，保证了实验结果的重现性和准确性；
过柱方法简单易操作，对操作人员要求不高，检测成本相对较低，能被很多企事业单位采用。
以下为详细解决方案，敬请参考！
花生油和粮谷中黄曲霉毒素的检测——UPLC-MS/MS法
1、适用范围
本方案适用于花生油、小米、高粱、糙米等样品中黄曲霉毒素的检测。本方案定量限是0.5 μg/kg。
2、提取
称取2.0 g 样品，加入8 mL 85%乙腈水，振荡2 min，超声10 min，6000 rpm离心2 min，收集上清液，待净化。
3、净化——ProElut AFT-3 12 mL（Cat#：65915）
将待净化液加入柱中，收集2 mL流出液，在50 ℃水浴下减压蒸干，用初始流动相定容到1 mL，过膜上机分析。
4、分析条件
4.1 UPLC 条件：
色谱柱：Leapsil C18，100 × 2.1 mm，2.7 μm (Cat#：86005)
流 速：0.3 mL/min
进样量：5 μL
柱 温：40 ℃
流动相：乙腈：0.1% 甲酸水
梯度
时间（min） | 0 | 6 | 7 | 15 |
乙腈（%） | 30 | 70 | 30 | 30 |
0.1% 甲酸水（%） | 70 | 30 | 70 | 70 |
4.2质谱条件：
电离模式：ESI | 扫描方式：正离子扫描 |
检测方式：多反应监测 | 电喷雾电压：5500 V |
雾化气压力：50 psi | 辅助气压力：50 psi |
气帘气压力：20 psi | 离子源温度：500 ℃ |
定性离子对、定量离子对、碰撞气能量及去簇电压见下表
药物名称 | 定性离子对 （m/z） (母离子/子离子) | 定量离子对 （m/z） (母离子/子离子) | 碰撞气能量/eV | 去簇电压/V |
AFB1 | 313.0/241.0 | 313.0/241.0 | 51 | 78 |
313.0/285.0 | 51 | |||
AFB2 | 315.0/259.0 | 315.0/259.0 | 40 | 77 |
315.0/287.0 | 40 | |||
AFG1 | 329.0/200.0 | 329.0/200.0 | 56 | 74 |
329.0/243.0 | 56 | |||
AFG2 | 331.0/189.0 | 331.0/189.0 | 60 | 61 |
331.0/313.0 | 60 | |||
AFM1 | 329.0/273.0 | 329.0/273.0 | 40 | 64 |
329.0/243.0 | 40 |
5、添加回收结果
粮谷及油类样品中黄曲霉毒素检测（添加水平10 μg/kg）的添加回收结果（%）
基质 | AFB1 | AFB2 | AFG1 | AFG2 | AFM1 |
花生油 | 94.0 | 102.4 | 106.6 | 93.2 | 96.2 |
糙米 | 96.0 | 99.2 | 87.2 | 108.4 | 87.6 |
高粱 | 94.4 | 93.8 | 86.4 | 95.0 | 92.6 |
小米 | 96.8 | 90.6 | 112.8 | 91.4 | 89.0 |
5种黄曲霉毒素10 μg/L MRM色谱图
黄曲霉毒素B1 10 μg/L XIC色谱图
黄曲霉毒素B2 10 μg/L XIC色谱图
黄曲霉毒素G1 10 μg/L XIC色谱图
黄曲霉毒素G2 10 μg/L XIC色谱图
黄曲霉毒素M1 10 μg/L XIC色谱图
花生油和粮谷中黄曲霉毒素检测—UPLC-MS/MS法相关产品信息：
货号 | 名称 | 规格 |
样品前处理 | ||
65915 | ProElut AFT-3 | 12 mL, 20/pk |
244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
30040 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
标准品 | ||
82O-S02017-1ML | 黄曲霉毒素B1(AFB1) [1162-65-8] | 2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL |
82O-S02018-1ML | 黄曲霉毒素B2(AFB2) [7220-81-7] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
82O-S02019-1ML | 黄曲霉毒素G1(AFG1) [1165-39-5] | 2 μg/mL溶于乙腈, 1 mL |
82O-S02020-1ML | 黄曲霉毒素G2(AFG2) [7241-98-7] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
82O-S02030-1ML | 黄曲霉毒素M1(AFM1) [6795-23-9] | 0.5 μg/mL溶于乙腈,1 mL |
色谱柱及保护柱 | ||
86005 | Leapsil C18 2.7 μm UHPLC/HPLC 兼容反相色谱柱 | 100×2.1 mm，2.7 μm |
HPLC溶剂?缓冲盐?离子对试剂 | ||
50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
50144 | 甲酸 HPLC级 | 50 mL |
通用色谱产品 | ||
52401B | 瓶架/蓝色（现货） | 50孔 |
52401A | 瓶架/白色（现货） | 50孔 |
1034 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
1035 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035*