流式细胞仪的使用注意事项
- 发布时间:2022/7/14 13:36:22
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流式细胞仪是对细胞进行自动分析和分选的装置。它可以快速测量、存贮、显示悬浮在液体中的分散细胞的一系列重要的生物物理、生物化学方面的特征参量,并可以根据预选的参量范围把想要的细胞亚群从中分选出来。
流式细胞仪主要由流动室和液流系统、激光源和光学系统、光电管和检测系统、计算机和分析系统四个部分组成,要想很好地应用流式细胞分析和分选技术,必需先对仪器进行调试,使其处于良好的工作状态,并能正确使用仪器。下面简要介绍流式细胞仪的调试项目及要点、使用的程序等等。
调试和校准
1、激光强度:除调整反射镜的角度以调整到所需波长的激光出光外,还要结合显示屏上的光谱曲线使激光的强度输出为最大。
2、液流速度:可通过操作台数字显示监督,调节 气体压力大小以获得稳定的液流速度。
3、测量区光路调节 :这是调试工作的关键。需要保证在测量区的液流、激光束、90散射测量光电系统垂直正交,而且交点较小。一般可在用标准荧光微球等校准中完成。
仪器的操作和使用
1、打开电源,对系统进行预热;
2、打开气体阈,调节 压力,获得适宜的液流速度;开启光源冷却系统;
3、在样品管中加入去离子水,冲洗液流的喷嘴系统;
4、利用校准标准样品,调整仪器,使在激光功率、光电倍增管电压、放大器电路增益调定的基础上,0和90散射的荧光强度*,并要求变异系数为最小;
5、选定流速、测量细胞数、测量参数等,在同样的工作条件下测量样品和对照样品;同时选择计算机屏上数据的显示方式,从而能直观掌握测量进程;
6、样品测量完毕后,再用去离子水冲洗液流系统;
7、因为实验数据已存入计算机硬盘(有的机器还备有光盘系统,存贮量更大),因此可关闭气体、测量装置,而单独使用计算机进行数据处理;
8、将所需结果打印出来。
操作和使用中的注意事项
1、光电倍增管要求稳定的工作条件,暴露的较强的光线下以后,需要较长时间的“暗适应”以消除或降低部分暗电流本底才能工作;另外还要注意磁屏蔽;
2、光源不得在短时间内(一般要1h左右)关上又打开;使用光源必须预热并注意冷却系统工作是否正常;
3、液流系统必需随时保持液流畅通,避免气泡栓塞,所使用的鞘流液使用前要经过过滤、消毒;
4、注意根据测量对象的变换选用合适的滤片系统、放大器的类型等;
5、特别强调每次测量都需要对照组。