RTCA与Transwell在迁移浸润实验的对比
时间：2020-11-09 阅读：797
RTCA与Transwell在迁移浸润实验的对比
RTCA技术简介：
原理：实时无标记动态细胞分析技术（RTCA, Real Time Cellular Analysis）可实现实时、动态、定量跟踪细胞迁移及浸润的动力学检测。该技术采用特殊工艺，将微电子细胞传感器芯片整合到细胞浸润迁移板（CIM Plate）的微孔膜下层。当细胞受到下室趋化因子的影响而穿过微孔膜并贴壁生长于微电极表面时，通过对电极阻抗值的检测从而便利并精确地实现对细胞迁移及浸润的检测。
原理：实时无标记动态细胞分析技术（RTCA, Real Time Cellular Analysis）可实现实时、动态、定量跟踪细胞迁移及浸润的动力学检测。该技术采用特殊工艺，将微电子细胞传感器芯片整合到细胞浸润迁移板（CIM Plate）的微孔膜下层。当细胞受到下室趋化因子的影响而穿过微孔膜并贴壁生长于微电极表面时，通过对电极阻抗值的检测从而便利并精确地实现对细胞迁移及浸润的检测。
RTCA技术细胞迁移及浸润实验步骤：
1、取出CIM Plate检测板，上室包被一定浓度的matrigel，CO2培养箱中放置约4小时。（细胞浸润实验所需，迁移实验无此步骤）
2、下室加入含血清或其它趋化因子的培养基，以加入无血清的培养基为对照。上下室装配后，上室中加入无血清培养基并在CO2培养箱中平衡1小时。
3、将CIM Plate检测板放入检测台上（检测台已预先放入CO2培养箱中），测定背景阻抗值。
4、将一定浓度梯度的细胞接种到CIM Plate检测板的上室里，室温放置半小时。
5、将CIM Plate检测板放入检测台上，即可获得细胞迁移或浸润的实时动力学曲线。
RTCA实时无标记技术细胞迁移及浸润实验检测流程：
1、取出CIM Plate检测板，上室包被一定浓度的matrigel，CO2培养箱中放置约4小时。（细胞浸润实验所需，迁移实验无此步骤）
2、下室加入含血清或其它趋化因子的培养基，以加入无血清的培养基为对照。上下室装配后，上室中加入无血清培养基并在CO2培养箱中平衡1小时。
3、将CIM Plate检测板放入检测台上（检测台已预先放入CO2培养箱中），测定背景阻抗值。
4、将一定浓度梯度的细胞接种到CIM Plate检测板的上室里，室温放置半小时。
5、将CIM Plate检测板放入检测台上，即可获得细胞迁移或浸润的实时动力学曲线。
RTCA实时无标记技术细胞迁移及浸润实验检测流程：
特点：
1、实验操作简单，步骤少，人为误差小。
2、采用无标记方法，不存在标记效率问题，并且对细胞无损伤，细胞在生理状态下进行检测，结果准确度高。
3、实验结果客观，重复性好。
4、实验数据自动获取，并可轻松获得两个不同时间点的IC50或EC50。
5、可一次检测多个细胞接种浓度，时间耗费少，费用低。
6、完整细胞效应图谱，提供大量、重要的动态反应信息。
利用RTCA技术获得的典型的细胞迁移及浸润实验结果：
实时监测不同浓度的趋化因子对HUVEC细胞迁移结果
实时监测不同浓度的matrigel 对Hela细胞浸润结果
Transwell简介：
原理：Transwell实验主要是利用一类有通透性的杯状装置（transwell 小室）实现对细胞迁移及侵袭的检测。该技术的主要材料为transwell小室，其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，杯子底层有一张具有通透性的膜。小室内为上室，培养板内为下室。细胞接种于上室，由于聚碳酸酯膜的通透性，下层培养液的成分可影响到上室内的细胞，从而可研究下层培养液成分对细胞生长、运动等的影响。
Transwell细胞迁移及侵袭的实验结果，通常采用直接计数法（直接人工读取穿膜的细胞数量）或间接计数法（MTT或荧光试剂标记等）。
原理：Transwell实验主要是利用一类有通透性的杯状装置（transwell 小室）实现对细胞迁移及侵袭的检测。该技术的主要材料为transwell小室，其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，杯子底层有一张具有通透性的膜。小室内为上室，培养板内为下室。细胞接种于上室，由于聚碳酸酯膜的通透性，下层培养液的成分可影响到上室内的细胞，从而可研究下层培养液成分对细胞生长、运动等的影响。
Transwell细胞迁移及侵袭的实验结果，通常采用直接计数法（直接人工读取穿膜的细胞数量）或间接计数法（MTT或荧光试剂标记等）。
Transwell细胞迁移及浸润（侵袭）实验步骤：
1、Transwell小室制备（细胞浸润实验所需，迁移实验无此步骤）
（1）包被基底膜
（2）水化基底膜
2、制备细胞悬液，具体细胞密度需要通过多次实验自己摸索。
3、细胞接种到transwell小室中，含趋化因子的培养基加入细胞培养板中。
4、细胞培养12-48小时（主要依癌细胞迁移及侵袭能力而定）。
5、结果统计：
（1）直接计数法：
A．用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B．染色：常用染色方法有结晶紫染色、台盼兰染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色。
C．细胞计数：选取5-10个*数。
（2）间接计数法：
A．用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B．细胞培养板中加入含0.5mg/ml MTT的培养基，将小室置于其中，膜浸没在培养基中，37℃ 4小时后取出。
C．加入DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10分钟，使甲臜充分溶解。取出小室，酶标仪上测OD值。
1、Transwell小室制备（细胞浸润实验所需，迁移实验无此步骤）
（1）包被基底膜
（2）水化基底膜
2、制备细胞悬液，具体细胞密度需要通过多次实验自己摸索。
3、细胞接种到transwell小室中，含趋化因子的培养基加入细胞培养板中。
4、细胞培养12-48小时（主要依癌细胞迁移及侵袭能力而定）。
5、结果统计：
（1）直接计数法：
A．用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B．染色：常用染色方法有结晶紫染色、台盼兰染色、Giemsa染色、苏木精染色、伊红染色。
C．细胞计数：选取5-10个*数。
（2）间接计数法：
A．用棉签擦去基质胶和上室内的细胞
B．细胞培养板中加入含0.5mg/ml MTT的培养基，将小室置于其中，膜浸没在培养基中，37℃ 4小时后取出。
C．加入DMSO，将小室置于其中，使膜浸没在DMSO中，振荡10分钟，使甲臜充分溶解。取出小室，酶标仪上测OD值。
Transwell 细胞迁移实验结果图片（很难做到对细胞准确计数）：
无血清培养基 10%FBS 无血清+VEGF
RTCA与Transwell在迁移浸润实验的优势对比：
Transwell | ||
标记物 | 无，对细胞无伤害 | 有，对细胞有伤害 |
标记效率对结果的影 响 | 无标记，无影响 | 有影响 |
实验数据 | 连续的实时动态曲线 | 多个重复孔获得单个数据 |
实验步骤 | 简单 | 繁琐 |
实验重复性 | 高 | 低 |
实验数据获取 | 自动 | 人工计数/酶标仪读数 |
时间量效检测 | 一次，同时获取 | 多次实验 |
数据准确性 | 高 | 低 |
实验耗时 | 短 | 长 |
检测过程 | 培养箱内进行（正常生长环境） | 培养箱外（非细胞生长环境） |
实验后的细胞样品 | 可用于其他细胞检测实验 | 只能丢弃 |
动态IC50值 | 可以 | 不能 |
实验结果实例 |