检测T细胞活化的快速动力学分析方法——安捷伦Seahorse XF Hu T细胞活化测定试剂盒
时间：2020-10-19 阅读：266
安捷伦Seahorse XF Hu T细胞活化测定旨在通过监测活化剂诱导的糖酵解反应来测量T细胞活化。该测定试剂盒可通过Seahorse XF分析系统测量刺激开始几分钟内的人(Hu)T细胞活化反应。这一过程通过测定与依赖糖酵解通路产生能量相关的质子释放率(PER)实现。该分析的理论基础为T细胞活化伴随着细胞能量生成的快速转换以及支持有效增殖、尺寸扩大、分化等能量需求的快速增长。Seahorse XF Hu T细胞活化测定试剂盒包括经安捷伦验证的ImmunoCult人CD3/CD28 T细胞活化剂和2-脱氧-D-葡萄糖(2-DG)，结合标准化方案、即用型XF PDL FluxPak、基于云的安捷伦Seahorse Analytics软件，可助研究人员可靠地测定T细胞活化！
安捷伦 Seahorse XF Hu T 细胞活化测定曲线
实验背景：
糖酵解活性快速增加是T细胞活化的早期标志性事件，并且是后续T细胞增殖和分化所必需的[1-3]。研究已证明，细胞糖酵解活性是T细胞活化的一个可靠衡量标准[4]。安捷伦Seahorse XF技术是一个用于体外测量细胞生物能量代谢的活细胞分析平台。利用XF平台，通过测量质子释放率(PER)来评估细胞糖酵解活性[5]，这种快速的分析方法为T细胞活化检测提供了一个早期窗口。
实验原理：
Seahorse XF Hu T细胞活化测定试剂盒专为人(Hu) T细胞而设计，包含 2 种试剂：ImmunoCult人CD3/CD28 T细胞活化剂和2-脱氧-D-葡萄糖 (2-DG)。
ImmunoCult 人CD3/CD28 T细胞活化剂(STEMCELL Technologies, Inc.)由可溶性四聚体抗体复合物组成，可结合CD3和CD28细胞表面配体，为T细胞活化提供所需的初级和共刺激信号。
2-DG是一种葡萄糖类似物，通过竞争性抑制中断糖酵解，消除T细胞活化相关的糖酵解增加。它在Seahorse XF Hu T细胞活化测定中用作阴性对照。
T 细胞活化诱导糖酵解增加
Seahorse XF Hu T细胞活化测定试剂盒支持两种实验设计：标准实验用于检测T细胞活化，调节实验用于研究调节剂的急性效应。标准实验包括两次加药：加入活化剂，然后加入2-DG(图A)。它通常用于比较不同供体T细胞或干预措施(例如，遗传操控或慢性化合物暴露)下T细胞的活化潜力。调节实验需要在加入活化剂之前加入测试化合物(图B)。此实验设计可以测试和监测所测试化合物对T细胞活化潜力的急性效应。
实验优势：
传统的T细胞活化测定方法很大程度上依赖于细胞表面标记物或细胞因子的产生，这些方法费时费力，需要数小时甚至数天才能得到结果。Seahorse XF Hu T细胞活化测定可以检测刺激后不久(几分钟内)T细胞的活化情况，这种快速分析方法为区分活化反应提供了一个早期窗口。XF Hu T细胞活化测定还能提供动态信息，用于实时监测和调节T细胞活化，可用于比较不同的T细胞亚型以及评估细胞对药物或遗传干预的响应。
词汇表：
参考文献：
1.Gubser, P. M. et al. Rapid Effector Function of Memory CD8+ T Cells Requires an Immediate-Early Glycolytic Switch. Nat. Immunol. 2013, 14, 1064-1072
2.Menk, A. V. et al. Early TCR Signaling Induces Rapid Aerobic Glycolysis Enabling Distinct Acute T Cell Effector Functions. Cell Rep. 2018, 22, 1509-1521
3.Jones, N. et al. Akt and STAT5 Mediate Naïve Human CD4+ T-Cell Early Metabolic Response to TCR Stimulation. Nature Comm. 2019, 10, 152-160
4.Kam, Y. 等，“使用安捷伦 Seahorse XF Hu T 细胞活化测定试剂盒实时检测和调节人 T 细胞活化”，安捷伦科技公司应用简报，出版号：5994-1983ZHCN
5.Romero, N. et al. Quantifying Cellular Glycolytic Rate Using CO2 -Corrected Extracellular Acidification (使用CO2校正的细胞外酸化定量分析细胞糖酵解速率)，安捷伦科技公司白皮书，出版号：5991-7894EN-D4,2017
声明：仅供研究使用，不用于诊断性操作。
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