食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法解决方案
时间：2017-10-11 阅读：2150
三氯蔗糖又名三氯半乳蔗糖，俗称蔗糖素，由英国泰莱公司(Tate&Lyie)与伦敦大学共同研制并于1976年申请的一种新型甜味剂。由于其具有甜度高(甜度为蔗糖的600倍)、甜味纯正等特点，被认为是目前zui的功能性甜味剂之一，代表了目前强力甜味剂研究的zui高水平。虽然科学家们经过长期的毒理实验证明其具有较高的安全性，但也有三氯蔗糖可诱发偏头疼发作的报道。
建立食品中三氯蔗糖的测定方法，可为食品生产企业提供生产性指导，并为质量监督部门提供食品质量监管依据。我国国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中制定了三氯蔗糖的HPLC-ELSD检测方法。
方法优势：
迪马科技在参考国家标准《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》基础上，进行了方法优化，推出《食品中三氯蔗糖的测定》方法，该方法：
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采用固相萃取-液相色谱法测定食品中的三氯蔗糖，使用ProElut PLS 固相萃取柱净化样品，通过HPLC-ELSD检测；
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前处理步骤简单、净化效果好、重现性好，定量限7.5 mg/kg，符合《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》对三氯蔗糖的*规定；
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适用于各省市出入境、质检、疾控、食品药品检验所、第三方检测机构、食品检测机构、大型食品生产商、高校和科研院所等。
以下为详细解决方案，敬请参考！
食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法
1、适用范围
本方案适用于液态奶、酸奶、酱油、醋、饼干、奶酪、奶茶、可乐和果冻中三氯蔗糖的检测，方法定量限7.5 mg/kg。
2、标准品配制
标准储备溶液：准确称取标准品，用水配制成10 mg/mL的储备液，吸取一定体积10 mg/mL储备液用水配成浓度为1000 μg/mL的储备液。
3、提取
3.1 含蛋白脂肪类液体：液态奶、酸奶、酱油和醋
10 mL样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；
3.2 含蛋白脂肪类固体：饼干、奶酪和奶茶
5 g样品，加入8 mL 水和2 mL 200 g/L乙酸铅溶液，振荡2 min，超声提取5 min，6000 rpm离心5 min，取10 mL上清液，待净化；
3.3 饮料：可乐（量取前超声排气泡）
10 mL样品，加入10 mL 水，混匀，取10 mL，待净化；
3.4 果冻
5 g样品，加入5 mL 水，热水超声溶解，混匀，趁热净化。
注：《GB 22255-2014 食品安全国家标准 食品中三氯蔗糖（蔗糖素）的测定》中提取液为75%甲醇水溶液，减压浓缩过程中暴沸严重，不易操作。
4、净化——ProElut 200 mg/6 mL PLS（Cat.#：68012）
| (1)活 化： | 依次向柱中加入5 mL甲醇、5 mL水，弃去流出液； |
| (2)上 样： | 将待净化液加入柱中，弃去流出液（控制流速不超过每秒1滴）； |
| (3)淋 洗： (4)洗 脱： | 向柱中加入5 mL 20%甲醇水溶液，弃去流出液； 向柱中加入3 mL甲醇，收集流出液； |
| (5)定 容： | 将洗脱液在50 ℃下减压蒸干，用流动相定容至1 mL，供HPLC分析。 |
5、色谱条件
色谱柱：Diamonsil C18(2) 150 × 4.6 mm，5 μm（Cat.#：99601）
流速：1.0 mL/min
进样量：20 μL
柱温：35 ℃
检测器：SEDEX LT-ELSD，温度：40℃，压力：3.5 bar，Gain：6
流动相：A：水；B：乙腈
梯度设置
| 时间/Min. | 0 | 14 | 15 | 22 | 23 | 30 |
| A（%） | 89 | 89 | 10 | 10 | 89 | 89 |
| B（%） | 11 | 11 | 90 | 90 | 11 | 11 |
6、添加回收结果
食品中三氯蔗糖的HPLC检测的添加回收结果
| 添加水平200 mg/kg | 添加水平20 mg/kg | 添加水平7.5 mg/kg | 空白含量(μg/mL) | ||||
| 回收率(%) | 加标量 | 回收率(%) | 加标量 | 回收率(%) | 加标量 | ||
| 早餐奶 | 99.01 | 10 mg/mL 200 μL | 109.82 | 1000 μg/mL 200 μL | 96.52 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 巧克力奶 | 99.70 | 10 mg/mL 200 μL | 100.91 | 1000 μg/mL 200 μL | 95.88 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 咖啡奶 | 100.34 | 10 mg/mL 200 μL | 112.34 | 1000 μg/mL 200 μL | 126.00 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 养乐多 | 128.83 | 10 mg/mL 200 μL | — | — | — | — | 130.8 |
| 酸奶 | — | — | 105.58 | 1000 μg/mL 200 μL | 123.42 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 酱油 | 77.85 | 10 mg/mL 200 μL | — | — | — | — | 113.48 |
| 醋 | 108.22 | 10 mg/mL 200 μL | 143.64 | 1000 μg/mL 200 μL | 205.47 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 饼干 | — | — | 102.64 | 1000 μg/mL 100 μL | 103.28 | 1000 μg/mL 37.5 μL | — |
| 奶酪 | — | — | 88.04 | 1000 μg/mL 100 μL | 82.78 | 1000 μg/mL 37.5 μL | — |
| 奶茶 | — | — | 101.48 | 1000 μg/mL 100 μL | 169.05 | 1000 μg/mL 37.5 μL | — |
| 可乐 | — | — | 103.97 | 1000 μg/mL 200 μL | 98.49 | 1000 μg/mL 75 μL | — |
| 果冻 | — | — | 93.89 | 1000 μg/mL 100 μL | 96.27 | 1000 μg/mL 37.5 μL | — |
食品中三氯蔗糖的测定——HPLC法相关产品信息：
| 货号 | 名称 | 规格 |
| 样品前处理 | ||
| 68012 | ProElut PLS | 200 mg/6 mL, 30/pk |
| 244358 | 12管防交叉污染真空SPE萃取装置 | 12位 |
| 4803 | 1,3,6mL柱管通用连接器 | 15/pk |
| 4806 | 考克(控制流量) | 15/pk |
| 99011 | 真空/正压两用泵，无油 | 1/pk |
| 99013 | 抽滤瓶套装 (包括硅橡胶管2米,2L抽滤瓶及橡胶塞) | 1/pk |
| 30039 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.22 μm 100/pk |
| 30040 | FitMax针头式过滤器 Nylon | 13 mm,0.45 μm 100/pk |
| 标准品 | ||
| 53-69293-100G | 三氯蔗糖[56038-13-2] | 100 g |
| 色谱柱及保护柱 | ||
| 99601 | Diamonsil C18(2) | 150 × 4.6 mm，5 μm |
| HPLC溶剂?缓冲盐?离子对试剂 | ||
| 50101 | 乙腈 HPLC级 | 4 L |
| 50102 | 甲醇 HPLC级 | 4 L |
| 通用色谱产品 | ||
| 52401B | 瓶架/蓝色（现货） | 50孔 |
| 52401A | 瓶架/白色（现货） | 50孔 |
| 1034 | 样品瓶（棕色/螺纹） | 2 mL, 100/pk |
| 1035 | 样品瓶盖/含垫（已经组装） | 100/pk |
| H80465 | HPLC 进样针 | 25 μL |
红色产品货号#30039、#30040、#1034、#1035*