挑战阿贝极限,点亮微观世界
- 发布时间:2020/8/18 14:19:00
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借助于光学显微镜,人类可以看到神奇的微观世界。但是由于阿贝极限的存在,限制了光学显微镜的分辨率。
阿贝极限
19世纪末,德国物理学家恩斯特·阿贝指出,光学显微镜分辨率的极限,大约是可见光波长的一半。可见光中波长短的蓝紫光波长在400nm左右。因此,如果两点之间的距离小于200nm,我们将无法分辨出这是两个点,这就是通常所说的“阿贝极限”。阿贝极限使我们无法更加深入地了解微观世界。
超分辨率显微镜
超分辨率荧光显微技术借助于一种特殊的荧光分子,从原理上打破了光学远场衍射极限对光学系统极限分辨率的限制,实现纳米级别的分辨率,点亮更加微观的世界。这种有意思的荧光分子被称为光开关荧光化合物。常见的超分辨技术有受激发射损耗显微技术(STED),光激活定位显微技术(PALM)、光学重构显微技术(STORM)、可逆荧光转移技术(RESOLFT)等。超分辨率显微镜对于所使用的光开关荧光化合物的光反应量子产率(PQY)有严格的要求。
光开关荧光化合物PQY的表征
Masahiro Irie教授团队报道了一种二芳基乙烯化合物在紫外光和可见光照射下发生的可逆闭环和裂环反应的过程。该研究使用355nm的紫外光打开此化合物的荧光使其处于“ON”状态,使用488nm的可见光可以关闭化合物的荧光,使其处于“OFF”状态。作者使用岛津的QYM-01*光反应评价系统对开环和裂环过程的光反应量子产率(φoc和φco)进行了测试。QYM-01可以自动测试光反应中吸收的光子数,所得光子数经过NIST功率计校准,可确保准确度,以进一步用于PQY的计算。
超分辨率显微镜要求光开关荧光化合物的裂环量子产率在10-2-10-3之间,作者把其中一种裂环量子产率φco为2X10-3的化合物应用在超分辨率显微镜RESOLFT上,并得到了相比于传统的共聚焦显微镜(CONFOCAL)分辨率高得多的图片。
参考文章:
《Photoswitchable Turn-on Mode Fluorescent Diarylethenes Strategies for Controlling the Switching Response》(Bull. Chem. Soc. Jpn. 2018, 91, 237–250)
*QYM-01是岛津全新发布的Lightway PQY-01光反应评价系统的前序机型。