COPAS大颗粒流式细胞分选系统
产品简介
详细信息
目前，微型模式动物、模式植物种子、大体积细胞及微球的分选在生命科学研究中有着非常广泛的应用，但是由于这些研究对象体积太大，普通流式细胞仪难以对其进行分选，而人工手动在显微镜镜下分选耗时耗力、效率低下、准确性难以保证，因此一种自动化大体积微粒分选系统应运而生，它就是COPAS蠕虫/胚胎流式分选系统/多参数生物微粒分析与分选系统。
COPAS大颗粒流式分选系统可以检测微粒的尺寸、光密度及荧光信号，并根据用户设定的域值，将相应的微粒移入96孔板或其它容器中，*的技术使得整个过程对于微粒的生物活性不会产生任何负面影响。
COPAS系统基于流式细胞技术的深度开发，与传统流式细胞仪相比，有两个重要改进：
*，系统管路直径增大，以适应20-1500um大小的生物微粒分选；
第二，采用的气流动态分选技术，保证收集到的生物活体的活性和完整性；
与传统流式细胞仪相比：
| 传统流式细胞仪 | COPAS* |
分选/分选参数 | 前向角（FSC） | TOF（Time Of Flight）飞行时间 |
侧向角（SSC） | EXT (Extinction) | |
荧光参数 | 荧光参数 | |
分选样本大小 | 1-100um | 20-1500um |
分选方式 | 电磁场 | 空气动力 |
分选压力 | 12 – 60 PSI | 2 – 5 PSI |
产品特点：
l **能够分选10-1500um生物微粒的自动化高通量分选系统
l 模式动物、模式植物种子与花粉、大体积细胞与细胞簇、微球/颗粒、高通量药物分选
l 同时检测微粒的五种光学参数：微粒的尺寸、光密度及三色荧光信号
l 气动分选技术，保证收集到的生物活体或敏感化学物质的活性和完整性，整个过程对微粒的生物活性不会产生任何负面影响
l 筛选速度达到每小时100,000个化合物，同时大大节省样品的消耗量
l 全自动、高通量、高精度筛选，适用于大规模筛选
应用领域：
COPAS大颗粒流式分选系统被广泛应用在模式动植物研究、大体积细胞研究及药物筛选等方面，具体应用对像包括微型模式动物:C .elegans、D .melanogaster、Zebrafish、Medaka, Mosquito, Xenopus;模式植物种子与花粉:Arabidopsis、花粉;大体积细胞与细胞簇:胚胎干细胞、胰岛;微球/颗粒:化合物结合微球、微球分析。
1.蠕虫发育表达谱
对单一基因来说，其在发育过程中表达的变化可依据其表达量来说明，什么时候表达开始或者减弱。如右图所示，不同基因在不同发育阶段表达量的变化：从幼虫到成虫，咽部基因的表达量一直在增加，会阴部基因只有蠕虫发育成熟才开始表达；肛门肌肉基因的微弱表达也可用该方法检测到。更多分析请参考：DuPuy, et al., Nature Biotechnology, 25, 663-338, 7 May 2007。
2.绘制斑马鱼侧面荧光图
基于参数峰值数量（Number of Peaks for each Parameter）进行分选。如下图，一条四日龄、野生型斑马鱼轴向侧面图（被标记红色荧光）。
3.在水凝珠内部生长的细胞簇
在细胞培养过程中，水凝珠作为细胞生长的基质，将细胞包裹在内。COPAS以Peak Width作为细胞生长程度的依据，分选出只含有单个细胞的水凝珠，进而得到来源单一的细胞簇。(Courtesy of S.Panke and M.Walser, ETH, Zurich.)
4.大鼠神经干细胞的分选
利用PI染料标记，分选大鼠神经干细胞，如右图：
5.在药物筛选方面的新应用
(1)结合分析，动力学与竟争分析(BindingAssays, kinetics and competition assays)
使用COPAS生物分选系统在以微球为载体的化合物库中筛选能与带有荧光标记的目标蛋白结合的化合物，将阳性化合物微球加人微孔板以进行后续的MS,NMR及其它分析，将没有结合蛋白的阴性化合物微球加人收集容器以便重复使用。另外，还可以根据荧光信号的强弱设定域值，将阳性化合物微球进一步分为结合能力不同的几群。目前，已经有科学家利用这种技术找到了一个能与纤维原细胞生长因子粘多糖结合位点结合的硫酸盐化合物。
(2) On-bead酶一底物筛选(On-bead enzymesubstrate discovery)
将需要研究的多肽，如点突变多肽，两端标记上淬灭荧光基团(FRAP )，然后连接到微球上，从而建立一个以微球为载体的多肽库。将多肽微球与目的蛋白酶结合，如果蛋白酶能够切断多肽，就会发出荧光信号。由于使用COPAS高速分选技术，阳性微球可以被快速分选，以保证微球表面仍有足够多的完整多肽以便进行后续分析。从建立多肽库到阳性多肽序列分析的整个实验流程，可以在一周内完成，与传统方法相比效率提高了一百倍。丹麦的一个研究小组已经利用该技术研究了枯草杆菌蛋白酶的多肽底物结构。
(3)蛋白酶抑制剂筛选
COPAS技术的一个更为复杂的应用是在蛋白酶抑制剂筛选方面。首先，将带有淬灭荧光基团(FRAP )的蛋白酶底物多肤连接在微球的一部分结合位点上，然后将需要筛选的抑制剂连接在微球的其它结合位点上，从而建立一个以微球为载体的抑制剂库。将微球与蛋白酶一起孵育，如果抑制剂无效，蛋白酶会将多肽切断，微球产生较强的荧光信号。如果抑制剂效果很强，蛋白酶无法切断多肽，微球没有荧光信号。如果抑制剂无法*抑制蛋白酶活性，那么仍会有部分多肽被切断，微球会发出较弱的荧光信号。这样就可以利用COPAS技术根据微球荧光信号的强弱对微球进行分选，从而快速找到不同抑制强度的抑制剂。这种技术在筛选抑制剂和优化反应条件方面具有很高的效率和很大的灵活性，可以实现每小时100000个化合物的高速筛选。利用这种技术，荷兰的一个研究小组在数周内找到了*和多种基质金属蛋白酶的多种抑制剂。
综上所述，COPAS大颗粒流式分选系统在大微粒分选方面的强大功能，必将为人类健康作出贡献。
*，系统管路直径增大以适应10-1500um大小的生物微粒，这比普通流式细胞仪用于分选单个真核细胞的管路大的多。每一个COPAS大颗粒流式分选系统都针对不同尺寸范围的微粒进行管路的优化设计，以便在高速高通量分选时获得的检测灵敏度与准确性。
第二，COPAS大颗粒流式分选系统技术的核心，即的气流分选装置(图1、表1)。当不需要收集时，分选系统会通过气体将液流吹人废液槽中;当需要分选的微粒经过时，分选系统会暂时将气体分流器关闭，使气流中断，然后再重新打开分流器，这样就能将含有待选微粒的液流喷人微孔板或收集容器中。这种分选的方式非常温和，可以保证收集到的生物活体或敏感化学物质的活性和完整性，对于后续的培养和分析不会产生任何负面影响，而普通流式细胞仪一般采用电磁场进行分选，会对生物活体产生致命的影响。
COPAS大颗粒流式分选系统可以同时检测微粒的五种光学参数，包括微粒的光密度(Extinction,EXT)、微粒的轴向长度(Time Of Flight,TOF )，以及三色荧光信号(表1)。样本悬液在鞘液的包裹下形成层流，生物微粒被聚焦在液流的中心输送到流动室，通过两个低能激光器来激发和检测光信号。其中，一个红色激光器( 670nm)被用来检测微粒的轴向长度和光密度，而另一个多色氢激光器(488/514nm)被用来激发多种荧光素。仪器的标准配置包括绿光、黄光及红光检测器，用来检测受激发的荧光素发出的光信号。这些实时检测的参数被用来将样本中的微粒分群，只有那些符合用户设定域值的微粒才会被分选系统加人微孔板或样品收集容器中，而那些不在用户设定域值范围内的微粒也可以被收集起来，以备后续的其它操作。zui终的分选速度取决于样本的浓度和需要分选的微粒所占的百分比，zui快可以达到每小时100, 000个微粒。