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低熔点琼脂糖   细胞培养

低熔点琼脂糖   细胞培养

正确的加热方式对琼脂糖的充分溶解和凝结至关重要，在此，我们提供以下几点作为正确制备琼脂糖凝胶的操作参考。 

 琼脂糖加热溶解所需时间短。 

 琼脂糖在 TAE 或者 TBE 缓冲液中不溶解，加热时，琼脂糖颗粒水化形成溶液，水化是时间依赖的，不同的琼脂糖水化点不同。琼脂糖纯度高，超微颗粒，非常适合作为电泳实验载体。对比于其他的琼脂糖，琼脂糖水化速度快，使用者无需煮沸过长时间，否则易导致胶液浓稠，不利于混匀，凝胶后易破损。

琼脂糖凝胶制备 

    用 1×TBE 溶液配制 1%浓度琼脂糖凝胶

 1. 用于制备胶液的锥形瓶体积应为胶液体积的 2-4 倍，缓慢向缓冲液中加入琼脂糖，边加边搅拌，防止琼脂糖聚集。记录瓶体和溶液总重量。 

2. 微波炉高火加热 30s，根据配制的溶液体积调整加热时间。加热时间与微波炉、瓶体大小和琼脂糖浓度有关。 

3. 摇匀琼脂糖溶液。 

4. 再次高火加热 30s，摇匀琼脂糖溶液。 

5. 将溶液再次放回微波炉，高火加热至沸腾（大约 10-35s）。接触移动时琼脂糖胶液可能会剧烈沸腾，小心操作，避免烫伤。从微波炉拿出后，室温冷却 1-2min，轻轻摇晃使液体里的气泡溢出。 

6. 重新放回微波炉，高火加热，使之沸腾约 15s，观察琼脂糖的溶解状态，如果仍有颗粒存在，重复该步骤直至所有晶体全部溶解。 

7. 待琼脂糖溶解成液体，重新称量总重量，计算蒸发液体量，用水补齐至原始重量，摇匀液体。 

8. 建议胶液冷却至 50-55℃时灌胶，有利于凝胶孔径均匀一致，不至于损伤制胶仪。灌胶前轻轻摇晃琼脂糖溶液，释放胶液中残存的气泡。 

9. 向制胶槽中灌胶，一般胶的厚度 3-5mm，灌胶后尽量排除梳孔之间或底部的气泡。 

10. 在室温放置（30-45min）使胶充分凝结。