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详见说明书

ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒

ANNEXIN V- FITC/PI 凋亡检测试剂盒操作步骤: 

1. 细胞样品的准备： 

a)对于贴壁细胞：小心收集细胞培养液到一离心管内备用。用不含 EDTA 的pancreatin消化细胞，至细胞可以被轻轻用移液管或枪头吹打下来时，加入前面收集的细胞培养液，吹打下所有的贴壁细胞，并轻轻吹散细胞。再次收集到离心管内。1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1ml 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。 

b)对于悬浮细胞：1000rpm 左右离心 5min，沉淀细胞。对于特定的细胞，如果细胞无法离心至离心管底，可以适当延长离心时间或稍稍加大离心力。小心吸除上清，可以残留约 50µl 左右的培养液，以避免吸走细胞。加入约 1ml 4℃预冷的 PBS，重悬细胞，再次离心沉淀细胞，小心吸除上清。 

2. 用去离子水按 1:9 稀释 Binding Buffer (2ml 10x Binding Buffer+18ml 去离子水)； 

3. 用 1x 结合缓冲液重新悬浮细胞，调节其浓度为 1-5×106/ml； 

4. 取 100µl 的细胞悬液于 5ml 流式管中，加入 5µl Annexin V/FITC 混匀后于室温避光孵育 5 分钟； 

5. 加入 5µl 的碘化丙锭溶液(PI)，并加 400µl PBS，立刻进行流式或荧光显微镜检测。