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Rat/Mouse PINP EIA【样本要求】：

采用血清或血浆 (EDTA 或肝素) 样本。样本收集后应尽快分离，长期储存需置于-20℃下，避免样本反复冻融。整个实验应使用相同的样本类型。

Rat/Mouse PINP EIA【操作步骤】：

1）加入50μl校准品、质控品于相应的酶标板MICROPLATE微孔内，每个做双孔。

2）加入5μl样本和45μl样本稀释液SAMPDIL于相应的酶标板MICROPLATE微孔内，，每个做双孔。

注：上述每一步操作应在15分钟内完成以减少误差。

3）采用多道移液器移取50ml PINP生物素PINP BIOTIN加入至每个微孔内。

4）盖上板盖在酶标板振荡器（500-700rpm）上于18-30℃下孵育1小时。

5）用稀释好的冲洗缓冲液洗板3次。

a) 自动洗板：设置洗板机分配每孔至少300μl冲洗液。重复洗3次。

b) 手工洗板：迅速颠倒倒出孔内物。每孔加入250μl冲洗液。再重复洗板2次。

在进入下一步之前，于吸水纸上用力拍打倒置的板以去除多余的冲洗液。

6）用多道移液器向所有微孔内加入150μl的酶结合物ENZYMCONJ。

7）盖上板盖于18-30℃下孵育30分钟。

8）重复步骤5）。

9）用多道移液器于每孔内加入150μl TMB底物SUBS。

注：TMB底物溶液易受到污染。仅移取检测所需要的量，丢弃没用完的TMB底物，请勿再倒回瓶内。

10）盖上板盖于18-30℃下孵育30分钟。

11）用多道移液器于每孔内加入50μl终止液HCL。

12）加入终止液后的30分钟内在酶标仪450nm（参考650nm）波长处读取吸光率。

【参考值（参考范围）】

目前尚没有明确的参考范围，各实验室应根据情况确定自己的范围。

Rat/Mouse PINP EIA【储存条件及有效期】:

试剂在2-8℃下保存可稳定至所标示的有效期。

复溶的标准品（CAL），质控品（CTRL）在-20℃下可保存8周。复溶的PINP生物素（PINP BIOTIN）在2-8℃下可保存8 周。

未使用完的包被抗体的酶标板条应放回至有干燥剂的箔袋中，将箔袋折好并密封于塑料封口袋中，2-8℃下可保存8周。

冲洗液可在室温下保存长达8周。
试剂可能变坏的现象：

1.任何一个试剂中有反常微粒子出现。

2.校准品0吸光率下降。

3.曲线范围偏离正常位置。

Rat/Mouse PINP EIA【适用仪器】：

适用于具有450nm、650nm波长的所有全自动、半自动酶标仪。