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　　【仪器网 技术前沿】双光子显微镜是一种结合了激光扫描共聚焦显微镜和双光子激发技术一种新技术。为了不损伤细胞，双光子显微镜使用了高能量锁模脉冲激光器，因该激光器具有很高的峰值能量和很低的平均能量，其脉冲宽度只有100飞秒，而其频率可以达到80至100兆赫。不仅如此，双光子显微镜检测效率高、易穿透标本、对细胞毒性小、只在焦平面上才有光漂白和光毒性，这也使得显微镜在观察厚标本、活细胞、定点光漂白实验上起着积极的作用。
 

　　随着科学技术的发展和社会的进步，人们对仪器设备的各项性能提出了更高的要求，科技工作者也投入于研发新产品和新技术。
 

　　在国家自然科学基金委重大科研仪器研制专项“超高时空分辨微型化双光子在体显微成像系统”的支持下，由北京大学分子医学研究所牵头，联合北大信息科学技术学院电子学系、工学院以及中国人民解放军军事医学科学院等组成的跨学科团队，推出了第二代微型化双光子显微镜。2021年1月6日，研发团队在《Nature Methods》上发表了题为《Miniature two-photon microscopy for enlarged field-of-view, multi-plane, and long-term brain imaging》的文章。
 

　　文中报道了第二代微型化双光子荧光显微镜FHIRM-TPM 2.0，其成像视野是第一代微型化显微镜的7.8倍，同时仪器还具备了三维成像能力，能有效获取小鼠在自由运动行为中大脑三维区域内上千个神经元清晰稳定的动态功能图像，并且实现了针对同一批神经元长达一个月的追踪记录。通过对微型光学系统的重新设计，FHIRM-TPM 2.0成像视野扩大到了420×420平方微米，微型物镜的工作距离扩展至1毫米，有效实现了非侵入式成像。此外，第二代微型化双光子荧光显微镜FHIRM-TPM 2.0可根据实验需求自由拆卸，新版微型化成像探头也可整体即时拔插。
 

　　新款显微镜的适用性和实用性得到了有效的扩大和提高，相信仪器的正式使用能够帮助神经科学家更自由地探索更多新的行为范式。