液相色谱柱的活化操作，以常见的C18反相分析柱为例，出厂时一般都封装有甲醇或乙腈等有机溶剂。随着时间的推移，色谱柱内的有机溶剂缓慢挥发，色谱柱内可能出现气泡。因此，新购买的色谱柱在使用前一般都要进行活化操作。
 

　　下面以常见的4.6mm X 150mm, 5μm粒径的C18反相分析柱为例：
 

　　1.  在活化色谱柱前，应先用相关试剂冲洗液相系统的流路，确保无污染物残留。切换至封柱试剂(一般为甲醇或乙腈)，置换流路内的试剂。
 

　　2.  停泵，将分析柱的进液口连上系统，移除出液口的堵头，出液口不连上系统。倾斜放置色谱柱，使其出液口高于入液口。
 

　　3.  以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱约5分钟，切换至0.2ml/min的流速继续冲洗。观察色谱柱出液口，若连续出液，停泵，将色谱柱出液口接入液相系统。
 

　　4.  以0.1ml/min的流速冲洗色谱柱，5分钟内将流速平稳提升至0.5ml/min继续冲洗色谱柱。
 

　　5.  以0.5ml/min的流速冲洗色谱柱，期间观察压力与基线是否平稳，直到冲洗的总流量达到30个柱体积。
 

　　6.  活化完成。
 

　　对于久置不用的类似型号色谱柱，再次使用前也可参考上述步骤进行活化。