色谱柱的清洗和再生方法
时间：2020-08-27 阅读：517
除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与*初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中*后的溶剂相溶。
1正相填料
用冲洗。
用甲醇冲洗。
用冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4阳离子交换填料
用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
冲洗。
5蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用50ml含0.1%三的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与*初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中*后的溶剂相溶。
1正相填料
用冲洗。
用甲醇冲洗。
用冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。
2反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。
3阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
4阳离子交换填料
用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
冲洗。
5蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。
6多孔石墨化碳
多孔石墨碳有四种再生的方法，选用哪一种方法依赖于被分析物和所用的溶剂。
酸碱再生
适合于使用极性流动相分析离子类分析物。
将色谱柱倒装
用50ml含0.1%三的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三乙胺或氢氧化钠的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用50ml含0.1%三的／水(1:1)溶液1ml/min流速冲冼。
用95%甲醇水溶液冲洗重新平衡。
将色谱柱改为正向。
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