中药洗剂中*的含量液相色谱测定


摘要：苦参总生物碱中含有*、氧化*、槐果碱等生物碱类成分，*的含量测定有报道用气相色谱法、液相色谱法（HPLC），但样品处理方法较复杂。2006年采用HPLC法测定制剂中*的含量，该方法操作简便、快速、准确、重现性好，可用于妇得康洗剂的质量控制。

1仪器和试药

液相色谱LC-6A（日本岛津）；TCQ-250超声波清洗仪（北京医疗设备二厂）；电子天平AEG-220（日本岛津）；紫外分光光度仪UV-265（日本岛津）；甲醇为优级纯；乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；*对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110805-200306）。妇得康洗剂由贵阳舒美达制药厂有限公司提供（批号：20041001、20041002、20041003、20041004、20041101、20041102、20041103、20041201、20041202、20041203）。

2方法与结果

2．1色谱条件

DiamonsilC18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相乙腈-甲醇-磷酸盐溶液（25∶10∶65）；检测波长220nm；流速1ml/min；柱温25℃。

2．2供试品溶液的制备

取本品50ml，摇匀，精密量取5ml，加浓氨试液调pH＝10后，用氯仿（30、30、30、20、20ml）提取5次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣、容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。

2．3对照品溶液的制备

取经P2O5减压干燥至恒重的*对照品适量，精密称定，加流动相制成每毫升约含0.530mg的对照品溶液。

2．4阴性对照品溶液的制备

取缺苦参总生物碱的样品适量，依供试品溶液的制备法，制备阴性对照品溶液。

2．5系统适用性试验

分别取对照品溶液、阴性对照品溶液、供试品溶液各10μl注入液相色谱仪，记录色谱图。结果表明供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，有相同保留时间的色谱峰，阴性对照无干扰。理论塔板数为8128。

2．6线性关系考察

精密称取*对照品适量，依对照品溶液制备法制备浓度0.106、0.318、0.530、0.742、0.954g/L的溶液，分别精密吸取上述溶液5μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值为纵坐标，对照品质量为横坐标绘制标准曲线，得回归方程为：Y=38788X－53（r=0.9998），表明*在0.53~4.77μg呈线性关系。

2．7精密度试验

精密吸取上述*对照品溶液，重复进样5次，测定*峰面积，RSD为1.58%，表明精密度良好。

2．8稳定性试验

精密量取本品适量，依供试品溶液制备法制备供试品溶液，再精密吸取供试品溶液10μl，依上述色谱条件在0、2、4、6、8h分别进行测定，记录峰面积，RSD为1.49%，表明供试品溶液在8h内基本稳定。

2．9重复性试验

分别精密量取同一样品5份，依供试品溶液制备法制备5份供试品溶液，精密吸取供试品溶液各10μl，依上述色谱条件测定，RSD为0.95%，表明该方法的重复性良好。

2．10加样回收率试验

精密量取0.5ml已知含量（35.767g/L）的妇得康洗剂5份，分别添加*对照品适量，按上述供试品溶液制备法制备加样回收供试品溶液，并进行测定，计算回收率，见表1。结果*的平均回收率为98.6%，RSD为1.17%。

2．11样品测定

精密量取样品适量，依供试品溶液制备法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液5μl与供试品溶液10μl注入液相色谱仪，依上述色谱条件测定，记录*峰面积，重复测定2次，取平均值。结果见表2。表1*的加样回收率试验结果210批样品中*的含量

3讨论

3．1检测波长的选择

精密称取干燥至恒重的*对照品适量，用流动相溶解配成标准溶液，对*标准溶液进行全波长扫描，结果表明标准溶液在200nm处有zui大吸收，考虑紫外吸收末端干扰大，且样品中*含量高，故选择检测波长为220nm。

3．2流动相的选择

选择了3种流动相：（1）乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钾溶液（1∶9），氢氧化钠溶液调节pH至6.0；（2）乙腈-0.005mol/L庚烷基磺酸钠溶液（25∶75）；（3）乙腈-甲醇-磷酸盐溶液（25∶10∶65）。经多次测试结果表明，流动相（1）峰分离不好，流动相（2）的峰型不好，出现脱尾现象，流动相（3）出峰时间合理，峰型好，分离度大于1.5。

3．3萃取次数的考察

取妇得康洗剂5ml，加浓氨试液调pH＝10后，分别用氯仿（30、30、30、20、20、20ml）提取3、4、5、6次，合并提取液，挥干氯仿，加甲醇适量溶解残渣，滤过，滤渣，容器用甲醇洗涤3次，每次5ml，合并洗液与滤液，定量转移至100ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，通过比较峰面积，5次萃取基本可将*萃取*。

3．4根据对10批样品的测定值，暂定本品含苦参总生物碱以*（C15H24N2O）计，每瓶不得少于0.24g。

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