实验一  DNA检测

目的：

检测DNA   

原理：

蛋白质分子中含有共轭双键的*、*等芳香族氨基酸。它们具有吸收紫外光的性质，其吸收高峰在280nm波长处，且在此波长内吸收峰的光密度值与其浓度成正比关系，故可作为蛋白质定量测定的依据，但由于各种蛋白质的*和*的含量不同，故要准确定量，必需要有待测蛋白质的纯品作为标准来比较，或且已经知道其消光系数作为参考。

不少杂质在280nm波长下也有—定吸收能力，可能发生干扰。其中尤以核酸(嘌呤和嘧啶碱)的影响更为严重。然而核酸的zui大吸收峰是在260nm。因此溶液中同时存在核酸时，必须同时测定OD260nm，与OD280nm。，然后根据两种波长的吸收度的比值，通过经验公式校正，以消除核酸的影响而推算出蛋白质的真实含量。

实验方法：

采用紫外可见近红外分光光度计中浓度扫描方式，按照图表配置标准蛋白质，绘制标准曲线

波长：280nm  直接从标准曲线读取被测液体的光密度值

以标准管各管光密度值为纵坐标，以蛋白质浓度为横坐标绘制标准曲线，然后根据测定管光密度值，直接查标准曲线求得样本中蛋白质的含量。

计算方法一 

选一种与待测样本蛋白质氨基酸组成相近似的蛋白质纯品，用生理盐水稀释至浓度为 lmg／m1，作为稀释标准蛋白质溶液。

用生理盐水稀释待测样本蛋白质至浓度约为lmg／m1，即为稀释样本蛋白质溶液。

紫外近红测试方法：

• 基线设置波长范围250-290nm
• 选择浓度扫描，

计算方法二

利用经验公式直接计算

准确吸取血清样本0.1ml，置于50ml容量瓶中，用生理盐水稀释至刻度，即500倍稀释，在280nm和260nm两处波长分别测得光密度值、再按下列公式计算。
1、OD280／0D260＜1.5时，用Lowry-Kalokar公式：
样本蛋白质含量(mg／m1)＝1.45OD280一0.74OD260 
2、OD280／OD260﹥1.5时，用Lamber-Beer定律计算：
样本蛋白质含量(mg／m1) = OD280／K×L＝（OD280／6.3×1）×10g／L
本实验样品：牛血清白蛋白E1%cm＝6.3（100ml／cm.g）
           K：克分子消光系数；E1%cm：百分比吸光度的吸光系数；
注：不同蛋白质中的*和*含量有差异，故标准管与测定管的蛋白质氨基酸组成应相似，以减小误差。