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使用分光光度法检测DNA纯度和计算DNA含量

时间:2014-11-23      阅读:1292

 

 
DNA在260nm处吸收强烈,OD260值为1的溶液相当于大约50μg/mL双链DNA,而蛋白质的特征吸收在280nm处,测定DNA提取物中260nm处和280nm处的吸收值OD260和OD280,可大致判断所提取的DNA的纯度。OD260/OD280的值在1.7~1.9之间,说明提纯度较好,低于1.7,说明提取的DNA中残留有较多的蛋白质,可用酚、氯仿继续抽提;若大于2.0,说明有RNA污染或DNA链断裂。提取的DNA量可用下式计算:
P=cV
式中,c为DNA浓度,单位为μg/mL;V为提取的DNA溶液的体积,单位为mL。
如提取的DNA样品为2mL,进行OD260值测定的检测样品为0.1mL+0.9mL TE缓冲液=1mL,DNA的稀释倍数=1mL/0.1mL=10倍,OD260和OD280值分别为0.63和0.35,则:
纯度= OD260/OD280=1.8。
样品中DNA浓度c=50μg/mL * OD260 * 稀释倍数=50μg/mL * 0.63 * 10 =315μg/mL
提取得到的DNA样品量是:P=315μg/mL * 2mL =0.630mg。
 
提供了多种型号的可以实现对DNA的检测。
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