徕卡荧光显微镜的成像方式

徕卡荧光显微镜是利用一定波长的光使样品受到激发，产生不同颜色的荧光，以用来观察和分辨样品中某些物质及其性质的一种显微镜，它在生物学和医学中有着广泛的用途。

徕卡荧光显微镜根据衬度形成的机制，对散射吸收像可以有两种成像方式：

(一)明场成像法(BFI)，即只让近轴区的透射电子柬通过物镜光阑，形成亮背景上的暗图形像。物镜光阑的孔越小，明场像的衬度越大；(二)暗场成像法(DFI)，即只让部分大角度的散射束或晶体的某衍射束通过物镜光阑，而将透射束挡掉。这样形成的是暗背景上的亮图形像。这种暗场成像法可以提高图像的衬度，是一种重要的成像方法。

徕卡荧光显微镜实现暗场成像的方法大致可分四种：(一)维持沿光轴垂直照明而移动物镜光阑；(二)利用倾斜照明而取在光轴方向的散射束，这称为中心暗场成像法(CDFI)；(三)采用中心挡束而有环形透光区的物镜光阑；（四)用环形透光的聚光镜光闻和中心圆孔形的物镜光阑。这里*种方法zui简便，但利用的是远袖区中的电子成像，故像差大，图像质量不会很好。第二法可避免上述缺点，但徕卡荧光显微镜的物镜光阑接收到的只是一小部分散衍射电子，因此效率较低。又光阑的一侧经常受到大量电子轰击，容易造成非对称污染，从而影响图像质量。环形物镜光闲在这方面有所改进，但缺点是制作困难，且难以做到*轴对称。鉴于对照明系统的要求相对放宽松，所以可采用zui后一个方案，在聚光镜处加一个环形光阑，对样品作空心柬照明。这种装置的效果。它的图像分辨率可与明场像的接近，而衬度又大大提高。

任何物质的分子都是由原子组成的，原子又由原子核和核外电子组成。在一定的条件下，分子处于一定的能量状态，分子的能量是由电子的能量Ee、原子核的振动能量Ek和分子的转动能量EB组成，而且Ee＞Ek＞EB。

在室温下分子处于zui低的能量状态即单线基态，当吸收光能以后，分子就产生能量的跃迁，由基态激发跃迁到*电子激发态或第二电子激发态。

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