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大豆制品中尿素酶活性的测定方法

时间:2014-11-01      阅读:4020

方法一:酸度计法

1. 原理:根据AOCS法,测定出自于大豆及加工产品的尿素酶活化度。

2. 仪器

(1) 可调节温度的恒温水浴锅

(2) pH计

(3) 50ml碘瓶

3. 试剂

(1) 磷酸二氢钾

(2) *

(3) 尿素[CO(NH2)2]

(4) 甲苯

(5) 0.05M磷酸缓冲液:

磷酸二氢钾3.403g    100ml水中

                                    混合1000ml,调pH为7.0

*4.335g    100ml水中

(6) 尿素缓冲液:取分析纯尿素15g,溶于500ml磷酸缓冲液,再加5ml甲苯防腐剂(防止霉菌发酵),调pH 值为7.0

4. 步骤

                         0.8g样品+40ml尿素缓冲液

试样粉碎到0.35mm以下                                    摇匀后放入                        0.8g样品+40ml磷酸缓冲液

            30℃ 恒温水浴槽中,每5min摇匀一次,反应30min,在5min内测定pH值。

5. 计算:尿素酶活化度(pH值上升值)=试样的pH测定值-空白的pH值

 

 方法二  尿素酶快速测定法——酚红法(参考法)

称取0.2g经磨细的豆粕样品放置试管中,注入2%尿素1ml,开始计时,加入指示剂*2滴,再加入8ml蒸馏水,(20-30s)开始震摇试管约10s,直至全脂豆粕浮在液体层,每摇动10s约等待3s,再观察溶液层颜色,如果出现粉红色,计下时间,与尿素酶活性表对照,如果颜色不变,则再摇10s约等待3s,然后再观察溶液层颜色,重复操作,如一直不变,再重头开始。(做实验以前,要先做空白实验,如果呈粉红色则指示剂已经不能用,重新配置指示剂。震摇停止后观察溶液的颜色时要等3s,不可太快或太慢,否则会看错,晚间不能做该实验。

时间(min)

豆粕尿素酶活性

0-1

0.9以上

1-2

0.9-0.7

2-3

0.7-0.5

3-3.5

0.5-0.4

3.5-4

0.4-0.3

4-4.5

0.3-0.25

4.5-5

0.25-0.2

5-6

0.2-0.15

6-7

0.15-0.1

7-9

0.1-0.05

12无色

0

    

方法三:尿素酶活性快速测定法——酚红法(粗略法)

1. 原理:尿素酶 + 尿素          氨气(用酚红作指示剂)  

2.试剂

(1) N氢氧化钠:称0.4g氢氧化钠溶于100ml水中。

(2) 0.1N硫酸:将2.77ml浓硫酸加入1000ml水中稀释。

(3) 尿素—酚红溶液:

0.14g酚红溶于35ml水中+7ml0.1N氢氧化钠

                                                混合 0.1N硫酸滴定  琥珀色

           21g尿素溶于300ml水中

方法:将一匙粉碎过的黄豆粕放入小玻皿中,将已调好的尿素——酚红溶液加入小玻皿中的豆粕上,直至*锦湿,停留5min,观察豆粕的红色反应。

少量红点

微量活跃(△pH=0.05-0.10)

约25%红点

中度活跃(△pH=0.10-0.25)

约50%红点

活跃(△pH=0.30-0.50)

约75%红点

非常活跃(△pH≧2.0)

5min没红点出现,停留25min任无

豆粕过熟

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