原代细胞培养中常遇到的误区

　　原代细胞(primary culture cell)是指从机体取出后立即培养的细胞。有人把培养的第1代细胞与传10代以内的细胞统称为原代细胞培养。原代细胞不仅广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株(系)研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还可应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代性作用，市场前景广阔。

　　原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此，较为严格地说是指成功传代之前的培养，此时的细胞保持原有细胞的基本性质，如果是正常细胞，仍然保留二倍体数。但实际上，通常把di一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。

　　下面由小编帮大家纠正一下原代细胞培养中产生的问题。

　　错误1：一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

　　纠正1：原代细胞对解冻过程非常敏感，因此将小瓶置于37℃水浴锅中，保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶，并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪，以便可以立即用于接种细胞，并置于培养箱中。

　　错误2：解冻match小瓶后直接离心原代细胞

　　纠正2：我们不建议在解冻后离心细胞，因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住，在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

　　错误3：允许原代细胞变得过于融合

　　纠正3：当生长至100    ,%汇合时，原代细胞可以变得衰老。记住，原代细胞不是100    ,%纯，因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时，对原代细胞进行传代培养。

　　错误4：传代原代细胞时过度胰蛋白mei消化

　　纠正4：当细胞传代时，使用低浓度的yi蛋白mei并在显微镜下密切监测细胞。此外，记得在胰蛋白mei消化后quan全中和细胞中的胰mei，因为任何活性的yi蛋白mei都将损伤细胞。

　　错误5：原代细胞可以很容易地重新冻存

　　纠正5：通常我们不推荐重新冻存原代细胞，因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感，重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

　　错误6：原代细胞可以无限的增殖

　　纠正6：与细胞系不同，原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外，如果你正在使用一个增值困难的细胞类型，你应该密切监测细胞形态，因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移，大量生长从而成为主要细胞。