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液相色谱仪LC-810解决蜂王浆中葵烯酸的检测问题

时间:2014-11-29      阅读:509

蜂王浆是*的*可供人类直接服用的高活性成分的超级营养食品。
    10-羟基-2-癸烯酸(10-HDA)是蜂王浆中*的一种不饱和脂肪酸,由于这种酸在自然界的其它物质中没有,只存在于蜂王浆中,所以也称为王浆酸。分离出的纯王浆酸呈白色晶体,在新鲜的蜂王浆中多以游离形式存在,性质比较稳定,具有很好的杀菌、抑菌、抗疲劳、抗衰老作用和抗癌、抗放射的功能,为此许多保健食品均添加有蜂王浆。因此作为评价蜂王浆及其制品质量优劣的主要指标之一的10-HDA含量测定显得尤其重要。至今为止,10-HDA 含量测定有薄层扫描法、分光光度法、气相法、液相法,且多见于分析蜂王浆中的10-HDA。薄层扫描法、分光光度法专属性和准确性较差,气相法处理繁琐,目前zui为通用的是HPLC法。
    液相法处理简单、结果准确,本公司基于以上情况,建立了超声提取、冷藏沉淀后,用对羧基苯甲酸乙酯做内标,反相液相色谱法测定蜂王浆及其制品中10-HDA含量的方法,取得了令人满意的结果。

一、主要性能特点:
1)蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱仪LC-810整套系统由高压恒流泵:2台,紫外检测器:1台,系统控制器:1台,混合器:1只,7725i手动进样阀:1只,反控色谱工作站:1 套(反控主机),液相色谱柱:1支(C18 4.6*250mn,5um),微量进样器:1支(50ul/100ul),进样支架:1只(进样阀用)等组成;安装、调试及使用都非常简单。

 

2)LC-810高压恒流泵是微处理器智能控制的往复式双柱塞并联泵,具有工作压力高、脉动小、稳定可靠、操作方便等特点。其机械组件由电脑辅助设计,各主要零部件均在*的数控加工中心制造,因此具有加工度高、泵体密封性能好、零件的互换性好等特点。

 

3)紫外检测器采用了平行的双锥孔流通池,样品池和参照池*处于对等的条件。锥孔设计的流通池,可以在同样的池体积情况下,提高通过池孔的光能量,明显降低了仪器的静态噪音和信号漂移。

 

二、仪器主要配置和检测分析条件

LC810高压恒流*

输液方式

微体积串联双柱塞

zui大输液压力

0~9999Psi

流量设定范围

0.001~9.999ml/min(以0.001

ml/min步长调节流量)

流量设定值误差

≤0.5%

流量稳定性误差

≤0.2%RSD

梯度误差

±1% (0~100%水/

丙酮水溶液2液梯度)

压力脉动

小于15Psi (流量1mL/min,

压力600~1600Psi)

泵密封性

压力为5400Psi,时间为10min,

压降小于400Psi

时间程序功能

尺寸

W260×H130×D420mm

重量

11kg

使用环境温度范围

4~4

紫外可见可变波长检测器

波长范围

190nm~700nm

波长示值误差

≤±1nm

波长重复性误差

≤±0.1nm

动态噪声

≤ ±0.75×10-U

(甲醇,1ml/min,254nm,20℃)

静态噪音

≤ ±0.5×10-5A

空池,响应时间1秒,20℃)

动态基线漂移

≤±1×10-4AU/h

(甲醇,1ml/min,,254nm,20℃)

静态基线漂移

≤0.5×10-4

(空池,响应时间1秒,20℃)

线性范围

≥104

zui小检测浓度

≤1×10-9 g/mL

(萘/甲醇溶液)

定性重复性

RSD6≤ 0.1%

定量重复性

RSD6≤ 0.5%

光谱带宽

6nm

流通池体积

8μL

光程

10mm

时间程序功能

尺寸

W260×H130×D420mm

重量

11kg

使用环境温度范围

4~40℃

(1)主要仪器配置
1、液相色谱仪;

2、色谱柱:C18,250*4.6*10 或250*4.6*5;

3、高速离心机(大于4500r/min;50ml);

4、超声波震荡仪;

5、涡旋混合器;

6、分析天平(万分之一);

7、溶剂过滤器(带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵);
 

(2)主要试剂

1、纯净水(二次蒸馏水)

2、甲醇:分析醇

3、乙醇:优级纯 

4、内标物:对羟基苯甲酸甲酯含量99.0% 

5、10-HAD标准品:99.0%以上。

    使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h 6.10-HAD标准溶液:取干燥后的10-HAD标准品约25mg,精密称定,加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中,用无水乙醇稀释至刻度,摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。7.盐酸(C=0.03mol/L):量取0.1mol/L盐酸100ml,加入200ml重蒸馏水中。

 

(3)色谱条件
    色谱柱为Kromasil C18 柱,流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2,流速1.0ml/min,对羧基苯甲酸乙酯作内标,检测波长210nm。本法简单、快速、准确,重现性好,回收率高(97.6%~101.8%)。

 

(4)样品处理

    样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀,取约0.5g,置于已称定的50ml容量瓶中,精密称定,加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml,置漩涡混合器上混合使样品溶解,加无水乙醇30ml,边加边轻轻摇动,再精密加入内标溶液10ml,并用无水乙醇稀释至刻度,摇匀,立即置超声波中超声15min,或置漩涡混合器上振荡15min,取出,在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定,应放置在冰箱中冷藏待测。

 

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