氧化磷酸化系列/转氢酶-1测试盒(微量法)

产品规格 : 100管/96样

测试方法：微量法

产品分类：氧化磷酸化系列

产品品牌：mlBio/酶联生物

产品包装：液体盒装

运输条件：快递包邮

应用范围：仅供科研研究使用

保存条件：低温避光保存

有效期：６个月

说明书 : 咨询或电询客服索取

供应商：上海酶联生物科技有限公司

注    意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

氧化磷酸化系列/转氢酶-1测试盒(微量法)

测定意义：
TH位于线粒体的内膜上，又称为呼吸电子传递链复合体六，催化NADH+NADP+和 NAD++NADPH相互转化。催化正向反应称为TH-1。线粒体NADH含量增加时会导致线粒体膜的H+电化学梯度升高，因而促进了电子传递链上ROS的产生。TH-1促进NADH转换为NADPH，从而提高线粒体的抗氧化能力。
测定原理：
NADH和NADPH均在340nm有特征吸收，因此TH催化的转氢反应不能导致340nm吸光度发生变化。用人工合成底物3-乙酰吡啶腺嘌呤二核苷酸磷酸（APADP+）替代NADP+，TH-1催化 APADP+还原生成的APADPH在375nm有特征光吸收，因此通过测定375nm光吸收增加速率，来计算TH-1活性。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。
样本的前处理：
组织、细菌或细胞中胞浆蛋白与线粒体蛋白的分离：
①准确称取0.1g组织或收集500万细胞，加入1mL试剂一，用冰浴匀浆器或研钵匀浆。
②将匀浆600g，4℃离心5min。
③弃沉淀，将上清液移至另一离心管中，11100g，4℃离心10min。
④上清液即为除去线粒体的胞浆蛋白，可用于测定从线粒体泄漏的TH-1（此步可选做）。
⑤步骤④中的沉淀即为线粒体，加入500uL试剂二，超声波破碎（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10秒，重复30次），用于TH-1活性测定。