如何养好贴壁细胞
 

　　1、正确解冻冷冻管
 

　　取出细胞冻存管后，应立即放入37度水浴锅内，使其快速解冻，轻柔摇动冻存管使其在1分钟内全部融化。防止水面没过冻存管。
 

　　2、采用适当的接种密度
 

　　培养贴壁型细胞时，采用正确的初始接种密度是十分重要的。通常，添加过多的细胞要好于添加太少的细胞；接种密度总是可以随后降低的。起始接种密度为每平方厘米1x 10 4 至2x10 4 个细胞；如使用难以培养的细胞或要使细胞适应无血清情况，则采用更高的浓度(Behie et al.；2004)。
 

　　3、帮助细胞迅速贴壁
 

　　细胞贴壁问题常常是个严重问题，特别是当在低血清或无血清培养液中培养细胞时。针对在传统细胞培养器表面发生的细胞贴壁问题，可以尝试使用康宁CellBIND ® 表面，其可用于培养瓶、滚瓶和CellSTACK ® 培养器。该表面是通过创新的微波等离子过程处理。微波等离子过程通过将大大高于传统的等离子或电晕放电用量的氧气混合到细胞培养表面来促进细胞贴壁，使其更具亲水性(可附着性)并提高表面的稳定性。
 

　　4、保持细胞的良好状态
 

　　保持的细胞培养液比率对于获得良好的细胞生长结果非常重要。开始时，每平方厘米的培养室生长表面面积可使用0.2-0.3毫升培养液(即，如培养瓶的生长表面面积为25平方厘米，则使用5-7.5毫升培养液)。使用更多的培养液可以降低换液需求，但由于培养液深度增加而环境为静止，也会减慢氧气向细胞的扩散。
 

　　5、选择高品质的血清
 

　　血清含有生长因子可促进细胞的繁殖，含有附着因子可促进细胞的贴壁，同时还具有抗*活性。血清同时也是矿物质、脂类及激素的来的血清有小牛血清、新生牛血清、胎牛血清和马血清等。牛血清是按照采血时间的早晚来分类的。采血时间越早，营养物质越丰富，所含抗体也越少，因而胎牛血清适合要求高的细胞系和克隆化培养。
 

　　康宁的血清Corning澳洲胎牛血清源自洁净的澳洲，从血源采集、加工到质检，整个过程遵循行业标准，确保产品品质。
 

　　6、轻柔收集细胞
 

　　在传代培养或收集时，不要过度消化细胞。在分离液中暴露时间过长会降低细胞活性，使其难以再次贴壁。在试图同时对许多培养器进行收集时常常发生这个问题。每次仅收集几个培养室，而不是试图一次收集许多个。如果使用无血清培养液，确保分离液已被灭活或已通过低速离心分离移除。使收集的细胞保持冷却状态直至准备好在新培养器中再接种。这会使其保持活性并减少细胞聚集。有各种*和消化液；对不同搭配组合进行试验，会提高收集效率和细胞活性(Freshney；2000)。
 

　　Behie, L.A., Kallos, M.S. and Sen, A. (2004). Bioprocessing Aspects of Neural Stem Cell Produc-tion in Bioreactors. BioProcessing Journal 3:27-42.
 

　　Freshney, R.I. (2000). Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique – 4th edition.Wiley-Liss, Inc. New York, NY.