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组织研磨机对提取动物关节软骨组织总RNA

时间:2023-03-13      阅读:221

实验目的
研磨破碎软骨组织(大鼠膝关节软骨),提取其总RNA。

实验原理
充分磨碎软骨样品(大鼠膝关节软骨),再用相关试剂提取其总RNA。

实验材料和器具
样品:大鼠膝关节软骨
仪器:多样品组织研磨仪
耗材:研磨罐,研磨珠
试剂:液氮若干

实验步骤
1.研磨软骨组织
1.1 取适量大鼠膝关节软骨组织,剪切成约1立方厘米小块;
1.2 将小块软骨组织置于液氮中2分钟或放入-80度冰箱冷冻30分钟;
1.3 将样品和研磨珠放入研磨罐中,盖好盖子;
1.4 将装好样品及钢珠的研磨管,放入已经在-20度冰箱预冷好的适配器中,加入变性液,β-巯基乙醇;
1.5 将适配器放入净信研磨仪中,在14单位频振条件下,研磨1min,可得到匀浆状的软骨组织;
2.总RNA提取
2.1 冰水浴下,加酸性水饱和酚,摇匀,加醋酸钠,氯fang、异戊醇混合液,冰水浴上15min;
2.2 4℃下,离心,取上清液,加氯fang、异戊醇混合液,离心取上清,加异丙醇,-20℃下沉淀,离心,得到凝胶状RNA和蛋白多糖混合沉淀,加无RNA酶水,溶解得胶状溶液;
2.3 取胶状溶液用plant RNAout试剂盒的RNA提取步骤得到总RNA沉淀,取沉淀,乙醇洗涤后用无RNA酶水溶解沉淀,即得关节软骨组织总RNA溶液。


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