吖啶酯（NSP-SA-NHS）的稳定性及注意事项
时间：2021-07-07 阅读：755
吖啶酯（NSP-SA-NHS）CAS：199293-83-9和相关化合物已被证明是非常有优势的化学发光标记物，稳定性，活性和敏感性超过了那些放射性同位素。在碱性条件下，NHS将会离去，吖啶酯将会以一个稳定的酰胺键与蛋白质结合形成吖啶化合物。反应完成后，多余的吖啶盐通过脱盐柱除去。在存在碱性过氧化氢，吖啶标记的蛋白不需要酶催化可自行发光。加入激发试剂后，体系立即释放光子，可以用430nm标准光度计检测。这个发光过程是十分短暂（整个过程的发生小于2秒），触发方案必须增加内部光度计和光子探测器。蛋白质，多肽，抗体，核酸都可以用吖啶标记。标记化合物在碱性过氧化氢的激发下快速发光，通过收集光子可以检测到标记化合物。
产品稳定性：
在酸性溶液中(pH<4.8)都很稳定，与蛋白质偶联物在室温下保存4周，其光量子产率不降低，冻干品在-20℃下，可以保存一年以上。
当pH>4.8，尤其在碱性溶液中，吖啶化合物由于部分发生水解降低了其稳定性，水解过程为不发光的暗反应过程；水解程度随pH增大而增大，随温度的升高而增大。
吖啶酰胺稳定性较高于吖啶酯结构，抗水解能力较强。
吖啶环或酚环或苯磺酰环上连有甲基等给电基团，由于空间位阻大，热稳定性增加；连有吸电子基团，有利于亲核取代反应而使其稳定性下降。
建议：偶联后保存用的缓冲液尽量用弱酸性的缓冲液，鼓氮气除去其中的氧气。密封避光低温保存。有条件的可以制成冻干样再保存。
注意事项：
吖啶酯除了DMF，也可以用无水DMSO等非质子性溶剂来溶解。通常吖啶酯用DMF较高溶解的浓度为4mM (约2.7mg/ml)，我司生产的吖啶酯中DMSO中溶解度可达10mg/ml。
标记前，由于吖啶酯末端羧基经NHS活化，较为活泼，请用非质子性的干燥无水溶剂来溶解；标记后，标记后吖啶酯与被标记物之间以酰胺键或者酯键等形式存在，酸性溶剂基本没有影响；吖啶酯本身活性位点在碱性和氧化环境下不稳定，因此应根据被标记物的稳定性配制相应的非强碱性非氧化的体系中处理和保存。
发光标记物在光照条件下有可能部分分解，以致影响发光效果。吖啶酯的实验操作和储存建议避光条件下处理，目前暂时没有具体的研究数据。
吖啶酯标记蛋白等大分子化合物建议用G25脱盐柱分离；吖啶酯标记小分子化合物建议用柱层析分离；
吖啶酯发光过程是十分短暂（整个过程的发生小于2秒），触发方案必须增加内部光度计和光子探测器；另外，本产品也可以使用配备自动进样器的多功能酶标仪进行发光数据采集，较大限度降低加样时间对采集信号的影响。