培养基的快速高效灭菌
时间:2020-11-10 阅读:205
目前培养基的制备过程分为:
1.配料:在容器中加入少量蒸馏水,按照配方换算称取各种药品依次加入到容器中,加所需水量定容后立即盖上瓶盖
2.溶解:加热溶解,特别是加有琼脂的固体培养基,一定要煮沸,琼脂的熔解温度95-97℃ ,且需要边加热边搅拌以防止烧焦。
3.调PH:用1mol/L的盐酸或的1mol/L NaOH把培养基调节到所要求的值。
4.分装:一般培养基放在三角瓶、罐头瓶或试管中灭菌使用。
5.包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入。
6.灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。
7.添加剂:待培养基冷却到50-60度左右,添加各种添加剂,如抗生素、生长因子等
8.摆斜面:灭菌后需要摆斜面的试管,使其凝固成为一个斜面,约占试管长度的1/2。倒平板:在超净工作台中进行,每个平板倒15-20mL,凝固后塑料膜封口保存
9.贮存:培养基在28℃下放置一天,无污染的即可使用。一般用牛皮纸包裹好存放于2-8℃冰箱中备用
培养基制备的关键就是灭菌阶段。要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。在高压蒸汽灭菌过程中,长时间高温会使某些不耐热物质遭到破坏,如使糖类物质形成氨基糖、焦糖;长时间高温还会引起磷酸盐、碳酸盐与某些阳离子(特别是钙、镁、铁离子)结合形成难溶性复合物而产生沉淀。并且在高温蒸汽环境下,培养基冷却阶段的降温也会比较缓慢,培养基长期暴露在高温环境下会影响其制备质量,因此如何快速又高效灭菌,成为培养基灭菌面临的一大难题:
SYSTEC灭菌器引进全新的灭菌理念为培养基快速制备保驾护航:
独立PT-100柔性探头:探头直接放在与培养基容器等大的参考瓶中(加水),实时监测培养基实际温度。而许多灭菌锅的探头放于腔体壁上,无法准确检测实际温度(注:由于液体升温延迟,腔体温度远远高于培养基温度)
过压式升温:与常规灭菌锅升温模式不同:通过升温阶段过压的方式,提高蒸汽温度,加快培养基的升温速度。
保压水冷系统:灭菌腔体外环绕冷却水环管,并通过空压机维持腔体压力。防止由于蒸汽冷凝导致腔体压力降低而液体爆沸产生的培养基损失,缩短50%时间
内部循环风扇:内部风扇促进腔体内部热量循环,提高水冷系统效率,缩短70%时间
超级冷却:作为三级冷却与水冷、风冷配合使用,加大热交换面积,缩短85%时间。
与传统灭菌锅对比图如下:SYSTEC整个灭菌过程全面优化,大大缩短了灭菌时间,这也是为什么许多生物制品公司选择systec的大原因。(右图为SYSTEC)
当然作为世界上的高压灭菌器,SYSTEC还具有安全性、灭菌高效性、可追溯性、可验证性等诸多优势,在灭菌的任何方面德国人都做到了。我们可以自豪的说,大多数灭菌锅只能算是消毒锅,而SYSTEC才能算得上真正意义的灭菌器。