我们都知道，目前western blot 实验是研究蛋白质中见、的一种实验技术，可与众多实验技术搭配，为蛋白质研究保驾护航。
 

　　但其耗时长、步骤多、变量杂，而我们在结果成像中，关心的点有哪些呢？这些我们关心的点，又体现在成像仪的哪些方面呢？
 

　　我们来一一分解：
 

　　1】看的见
 

　　在western blot成像中，我们关心的就是辛辛苦苦做完的实验，能不能得到我们想要的效果，即条带能不能看得见。
 

　　*条带能不能看见，实验中事关蛋白样品的表达量和实验步骤的严谨性，蛋白表达量低、实验不熟练或操作不当等都可能造成我们检测的印迹膜上蛋白量较少。
 

　　*此外，能不能看的见事关成像设备接收到的样品信号是否*，这取决于成像仪的灵敏度，而成像仪的灵敏度则取决于以下几点：
 

　　①定焦镜头的开口直径：开口直径即镜头光圈的大小，开口直径越大→此镜头单位时间内进光量也就越多→能接收到的样品信号越全→所检测到的目的蛋白定量越灵敏。
 

　　②像素融合：成像设备中目前大都有像素融合模式，在软件进行光信号计算时，一般情况下是以单个像素颗粒接收面积为单位进行计算，而像素融合则是以融合后的颗粒为计算单位，比如3x3像素融合，那么计算的单位信号接收面积则是3x3=9个像素颗粒面积，信号接收面积增大，光信号接收更*。
 

　　8x，即8个像素颗粒融合
 

　　2】看的清
 

　　我们在看到条带之后，还希望能看的清楚，拍出来的条带清晰漂亮，相邻条带间的区别能很好的辨别。
 

　　*条带能不能看的清在实验中反应在：
 

　　①提取的蛋白总样品中分子量相近的蛋白种类多不多，比如蛋白A、甲基化A、磷酸化A同时都存在于总蛋白样品中，那么化学发光中检测出来的条带可能就会3条条带相邻甚至叠合成了一条条带。这种情况常见于实验室的修饰化(如磷酸化)蛋白的研究中，一般可以选用荧光成像来解决这种问题。
 

　　②检测样品的背景清不清晰，如封闭完不*、封闭液质量好不好、抗体特异性好不好、印迹膜干不干净等各种情况。
 

　　*条带能不能看的清还要看成像设备：
 

　　①成像仪的像素分辨率够不够，高像素的分辨率下，条带可以清晰看到，相邻条带间的分辨能力也会提升。
 

　　②成像仪在接收信号时，暗电流情况以及除蛋白信号外杂信号多不多等都会影响成像背景。通常情况下暗电流越弱杂信号越少，成像背景越干净。
 

　　总结一下，我们在western blot 成像中首要关心的就是条带能看的见、看的清、看的干净。所以这就要求成像仪的灵敏度必须要高，某天研究的蛋白表达量较低时不至于检测不出来而得出错误的实验结果；还要求成像仪的分辨率即像素要达到一定的参数值；其次，成像仪暗电流很弱，杂信号很少，成像背景才会更清晰。
 

　　好了，今天关于教你如何辨别成像仪(——从技术和实验双角度，看western blot结果成像)的内容就到这了，下期我们会继续深入了解western blot 成像仪的世界。
 

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