CART是有生命的药物，其“半衰期”可达几年，使其可控、避免毒副作用，如CRS尤为重要，已经有不少策略用于控制CART，此次整理分享的文章控制CART的策略很简单、巧妙 – 用一个再熟悉不过的小分子化药，具体内容如下：

作者制备了针对CD19以4-1BB为共刺激域的CART

CAR和配体（如CD19）互作结合后LCK磷酸化，引发CD3ζ和ZAP70磷酸化，终激活转录因子NFAT，使CART表达各种效应蛋白，不管什么类型的CART都是这样的信号传递过程，所以文章作者想用药物抑制CAR信号的传递，从根本上“卡”住CART激活，他选的是*（dasatinib，抑制ATP和LCK的结合从而抑制LCK磷酸化），先体外验证： CART和表达CD19的K562细胞共孵育，随*浓度升高，CART对靶细胞的裂解减少，说明*可抑制CART的细胞杀伤作用

宏观的看到*可抑制CART的杀伤作用后，看*对CART发出的“炮弹”细胞因子的作用，发现*可抑制CART分泌细胞因子

*抑制了靶细胞对CART的激活（CD25、CD69上调）及激活后的增殖

*除了可以抑制CD8 CART，还可以抑制CD4 CART的激活、细胞因子分泌

*也可抑制CART，作者将*和*做了一个比较：*只有提前和CART细胞孵育24小时才可抑制CART细胞因子的分泌和对肿瘤细胞的杀伤，而*可立刻起效，效果强于*

体外已经确证*可抑制CART的功能，看看分子层面*引起的变化，发现*抑制了CART细胞LCK、CD3ζ、ZAP70的磷酸化– 与设计的一致

转录因子NFAT是LCK、CD3ζ、ZAP70的下游，弄了个GFP报告系统，发现*抑制了NFAT的表达（这的K562是CD19阴性的哦，前面用的K562是强制表达了CD19的K562）

*也可抑制CD28为共刺激域的CART

*对其他靶点的CART也有抑制作用

*可以在开始的时候就加入使CART处在“关闭”状态，无法裂解靶细胞（dasa组），也可抑制已经激活的CART对靶细胞的裂解（Dasa + 1 hour组）

对于已经激活的CART，激活1小时后加入，*可抑制CART的增殖，但当激活时间过长则无法抑制

前面发现*可使CART处在“关闭”状态，也可“关闭”已经激活的CART，那么*“关闭”的CART还能再“打开”吗？CART、靶细胞、*三者共孵育2小时，可见这2小时内*无法裂解靶细胞，撤去*，CART裂解靶细胞的作用迅速恢复，暗示*对CART的抑制是可逆的，在我们需要CART的时候还能再让它“回来”

用*“关闭”2小时CART能回来，作者又试了药物连续作用1天和7天后撤药，发现CART裂解靶细胞的作用还能恢复

*连续作用1天或7天后，CART遇到靶细胞分泌细胞因子、增殖的作用也能恢复，再次说明*可逆的抑制作用

*除抑制作用可逆外，对CART细胞活力没有显著影响

体内实验验证*的作用，发现第3-5天使用*后肿瘤负担出现上扬、细胞因子IFNγ分泌减少，停止使用后CART恢复作用，重新抑制肿瘤生长、分泌IFNγ，且暂时“关闭”CART促进了CART的抑瘤作用

4-1BB共刺激域的CART做完，在CD28共刺激域的CART上再验证一遍，再次发现*可暂时“关闭”CART，撤药后CART功能恢复，且抑瘤作用增强（歇会再上战场越战越勇？）

*可显著抑制CART灌注后引起的细胞因子风暴（CRS），延长小鼠存活时间

文章思路很简单，就是小分子抑制细胞信号传导，可背后是什么？是作者对生命基本结构、功能单元细胞运作逻辑和“paper”逻辑的深刻理解，不需要设计、制备新的细胞、蛋白，也没有花哨的实验，简单，但却巧妙……

Katrin Mestermann, Theodoros Giavridis, Justus Weber, Julian Rydzek, et al. The tyrosine kinase inhibitor dasatinib acts as a pharmacologic on/off switch for CAR T cells [J]. Sci. Transl. Med. 2019.

想了解更多CNS级期刊内容，请关注我们的公众号，常有更新哦，也可加笔者交流：qianle522568