【应用笔记】- Amersham Typhoon™在分子水平调控中应用（二）
时间：2020-11-10 阅读：168
上周我们介绍了Amersham Typhoon™在染色质复制相关研究中的应用，本周我们来看一下Amersham Typhoon在转录后调控中的应用。
mRNA和长非编码RNA（LncRNA）的甲基化在病毒、细菌、动植物中普遍存在，并影响mRNA的加工、翻译及稳定性，参与细胞发育、分化以及热激转录等多个重要的生理过程。
RNA甲基转移酶和去甲基化酶可以在mRNA和LncRNA上引入或去除N6-甲基腺苷（m6A），调控其甲基化状态。RNA甲基转移酶能够有效催化甲基转移，研究表明RNA甲基转移酶由METTL3和METTL14构成，但各亚基具体功能尚未明确。
发表在Nature上的文章“Structural basis of N6-adenosine methylation by the METTL3–METTL14 complex”里，通过METTL3-METTL14异二聚体与配体（S-腺苷*）共结晶，发现METTL3和METTL14均采用I级MTase折叠，并通过广泛的氢键相互作用，产生带正电荷的凹槽，推测该富含正电凹槽为RNA结合区。同时S-腺苷*只与METTL3结合，而与METTL14不结合。
将预测的RNA结合区内正电氨基酸突变为不带电或带负电氨基酸，用32P标记RNA，进行EMSA实验，验证RNA与蛋白复合体的结合，实验结果用Typhoon进行成像分析。发现当该区域氨基酸突变后，RNA与METTL3和METTL14复合体的结合减少，表明该富含正电沟槽为RNA结合区。结合其他实验证明，在m6A MTase复合物中，METTL3结合S-腺苷*，催化甲基转移，而METTL14提供结合RNA的支架平台。
本周的分享就到这里了，希望对大家有所帮助。