时间没有等我，是你忘了带我走 ，我左手过目不忘的的萤火，右手里是十年一个漫长的打坐。转眼2019年已经接近尾声了，关于免疫组化问题，上海古朵生物一一为您解答
 

　　1、染色过强
 

　　原因及相关解决方法
 

　　a 抗体浓度过高或孵育时间过长 降低抗体滴度、抗体孵育时间：室温1小时或4度过夜
 

　　b 孵育温度过高超过37度 一般在室温20-28度
 

　　c DAB显色时间过长或浓度过高 显色时间不超过5-12分钟，以显微镜下观察为准
 

　　2、非特异性背景染色
 

　　原因及相关解决方法
 

　　a 操作过程中冲洗不充分： 每步冲洗3次每次5分钟
 

　　b 组织中含过氧化物酶未阻断 ：可再配置新鲜3%H2O2封闭孵育时间延长
 

　　c 组织中含内原性*：正常非免疫动物血清再封闭
 

　　d 血清蛋白封闭不充分：延长血清蛋白封闭时间
 

　　3、染色弱
 

　　原因及相关解决方法
 

　　a 抗体浓度过低、孵育时间过短：提高抗体浓度、孵育时间不能少 于60分钟
 

　　b 试剂超过有效使用时间： 应更换试剂
 

　　c 操作中添加试剂时缓冲液未沥干 ：每步滴加试剂前沥干切片中多余的缓冲液
 

　　使试剂稀释 (应防止切片干燥)
 

　　d 室温太低 ：低于15度要改放在37度孵育箱孵育30-60分钟或4 度冰箱过夜
 

　　e 蛋白封闭过度：封闭不要超过12分钟
 

　　4、染色阴性
 

　　原因及相关解决方法
 

　　a 操作步骤错误：应重试设阳性对照
 

　　b 组织中无抗原：设阳性对照以验证试验结果
 

　　c 一抗与二抗种属连接错误：仔细确定一抗二抗种属无误
 

　　上海古朵生物是一家专业从事“产品研发生产、市场销售、技术服务”为一体的高科技生物技术公司，公司生产的产品质量有保证，含量高，能够给实验带来准确的结果。如有需要可咨询我司销售人员，我们将竭诚为您服务。