在操作酶联免疫试剂盒实验时，有很多技术问题是比较常见且易错的，而就是这些问题困惑不少实验操作员。小编根据技术部的问题处理总结，整理出了几个比较常见的问题，跟着小编一起往下看吧：
 

　　一、为什么必须设置复孔？
 

　　为获得更准确的实验结果，强烈建议标准品及样本进行复孔检测，因为复孔检测可以：计算平均值，确保实验结果更准确；解决实验中误操作造成的跳孔现象；计算CV值，对实验的操作和试剂盒的精密度进行评估。
 

如图
 

　　二、重复性差怎么办？
 

　　1.样品数量不一，加样时间长短不一(重复某一样品时，加样时间尽可能与di一次接近)。
 

　　2.酶标仪滤光片不对或输入波长不对(TMB显色用450/630波长)。
 

　　3.酶标仪测定重复性差(校对酶标仪)。
 

　　三、为什么标准曲线线性较差？
 

　　需要按照推荐方式保存标准品；溶解标准品之前需短暂离心，*收集粉末；确保标准品*溶解和混匀，然后再进行后续的系列稀释步骤，确保每一步都充分混匀且移液；显色的恰当终止；选择合适的数学拟合方程绘制标准曲线。
 

　　四、为什么所有试剂和检测样本要平衡至室温后再进行加样操作？
 

　　温度是ELISA结合反应的重要影响因素。为了使所有样本在一致的温度下反应，实验前务必将所有试剂平衡至室温，包括检测样本。避免因温度的动力学反应差异而导致ELISA检测结果的不准确。