超低温保存技术 在花卉种子上应用
时间:2017-12-28 阅读:684
超低温保存技术广泛应用于园林花卉种子保存的可能性,对18个科47种花卉种子进行了液氮超低温保存研究,除了两种花卉种子进入液氮后炸裂外,其余45种花卉种子保存后都有一定发芽率,有些花卉种子保存后种子发芽率还高于保存前。
结果表明:?液氮超低温保存技术可以广泛应用于园林花卉的种子保存。?花卉种子在自然含水量状态即可存于液氮中。? 从液氮罐中取出后,采用35~40°C温水浴化冻有较高的发芽率。? 液氮超低温保存对一些花卉种子萌发表现出促进作用。
种质资源设施保存,是在人工控制环境下排除环境压力和破坏,有效保存种质材料的zui安全的保存方式,它包括种子低温保存、超低温保存、种质离体培养保存等技术方法。
一般来说,它包括以下6个步骤:
(1)前培养:对培养体短期的生长锻炼处理,使其提高耐液氮保存的能力。
(2)防冻:培养体放入防冻液中,使其细胞降低冰点,减少因形成冰晶可能造成的损伤。
(3)变温冷冻:按照不同变温模式降温冷冻,降温速度依不同种质材料采用特定的速度。
(4)超低温保存:将冷冻材料保存到有效低温环境中,以防止冰的游移或解体。
(5)解冻:一般认为快速解冻更好。从液氮环境中取出封装好的材料,与其容器一同放入+40℃的无菌水浴中,直到解冻后才回到室温下,未封装的材料放到20~30℃的液体培养基中解冻。
(6)生命力测定:如用TTC染色法等。
种质材料的超低温保存,传统的技术有干冻法、预冻法和两步法,上世纪80年代末和90个代初玻璃化法和包埋脱水法开始应用于植物材料的超低温保存。
预冻法:将种质材料在添加保护剂(如蔗糖、二甲亚砜、甘油等)后置于低温冰箱或液氮蒸汽箱(-10~-70℃)中冰冻若干小时后投入液氮贮存。
两步法:种质材料在添加保护剂后,用程序降温仪以某个速率(每分钟0.1~0.5℃)降温至转移温度(-40~-70℃),然后投入液氮中贮存,两步法较预冻法更为严格。