微生物法与HPLC法测定*含量方法比较
时间:2018-09-10 阅读:740
GB 10765-2010《婴幼儿配方食品》中规定了*可以作为婴儿配方食品添加物。因此准确地测定*的含量对婴幼儿配方产品的生产加工、功效评价等有重要意义。维生素的检测方法有仪器法、微生物法和基于微生物法原理的试剂盒法。微生物法是目前应用为广泛的,也是美国分析化学家协会的推荐方法。目前,国家标准GB 5009.211-2014《食品中*的测定》和GB 5413.16-2010《婴幼儿配方食品和乳品中*(*盐活性)测定》中对食品和婴儿食品和乳制品中*的测定均采用微生物法。
除微生物法以外,还可以选用液相法测定*的含量。液相色谱法是利用高压*将规定的流动相泵人装有填充剂的色谱柱,对供试品进行分离侧定的色谱方法。注人的供试品,由流动相带入柱内,各组分在柱内被分离,并依次进人检测器,由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。
液相法测定食品中*含量操作方法和所用药品分析相似:称取磨细的样品置于离心管中,加入流动相液体,超声波提取15 min-30 min。取出后加入流动相定容,摇匀后过滤,滤液用 HPLC 法分析。
在有限的空间与营养成分条件下,微生物的生长过程会受到竞争与抑制的作用。选用微生物法测定*含量时,自配的基础培养基杂质含量高,建议使用HiMedia公司生产的*测定用培养基(货号:M543)。培养基的pH值对L.C生长很重要,一般保持在pH6.8~7.2,过高过低均不利于细菌生长。测定*常用的菌种酪乳酸杆菌(ATCC 7469)。为保证测定管中滴加等量的接种液,接种液可用10mL灭菌针筒吸取,水平固定于铁架台上轻轻旋转推杆,滴加菌液。测定管比色前,应用混匀器将菌液摇匀后进行比色。
微生物法与液相色谱法相比较,其优点是可以测定成分复杂样品中的化合物形式*,结果更准确;对于添加剂形式的*则与HPLC法具有同样的准确度,同时微生物法具有灵敏度高的优点,检测限可达到0.01ng·mL-1,而液相色谱法检出限为10μg·mL-1,且价格便宜。但微生物法实验周期长,每周一次的菌种传代保藏比较繁琐;液相色谱法的特点是测定结果准确、操作简便、省时省力、分析速度快、分离效果好,是近年来发展速度较快的测定*的方法,分析操作方法和所用药品分析相似,适合检测纯品,但分析成本高,液相色谱仪价格及日常维护费用贵。