紫外分光光度计的用法及使用过程
- 发布时间:2020/11/5 14:38:27
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紫外分光光度计的用法及使用过程
紫外分光光度计是根据样品的浓度和吸光度是成正比关系的,浓度越大,吸收值越高,也就是琅伯-比尔定律的原理研发的测试物质含量以及定性的实验室常用仪器。它的应用领域涉及制药、医疗卫生、化学化工、计量科学、农业、林业、渔业等领域中的科研、教学等各个方面,用来进行定性分析、纯度检查、结构分析、络合物组成及稳定常数的测定、反应动力学研究等。
所以紫外分光光度计用的较多的还是定量分析,定量分析的种类有很多,这里介绍常用的几种定量分析方法:
1、法:法是紫外可见分光光度计诸多分析方法中使用多的一种方法。这是一种以琅伯-比尔定律A=εbC为基础的分析方法,某一物质在一定波长下ε值是一个常数,石英比色皿的光程是已知的,也是一个常数。因此,可用紫外可见分光光度计在λmax波长处,测定样品溶液的吸光度值A。然后,根据琅伯比尔定律求出C=A/εb,则可求出该样品溶液的含量或浓度。
2、标准法:在选定的波长处,在相同的测试条件下,分别测试标准样品溶液C标和被测试样品溶液C样的吸光度A标和A样。然后,按下式求得样品溶液的浓度或含量。
C样=A样/A标×C标
3、标准曲线法
紫外可见分光光度计常用的定量分析方法是标准曲线法。即先用标准物质配制一定浓度的溶液,再将该溶液配制成一系列的标准溶液。在一定波长下,测试每个标准溶液的吸光度,以吸光度值为纵坐标,标准溶液对应得浓度为横坐标,绘制标准曲线。然后将样品溶液按标准曲线绘制程序测得吸光度值,在标准曲线上查出样品溶液对应的浓度或含量。
4、 其它分析方法
除上述几个分析方法外经常使用的分析方法外,还有比吸收系数法、Z小二乘法、解联立方程法和示差分光光度法。
(2) 定性分析
如果未知物的紫外吸收光谱的z大吸收峰波长λmax、z小吸收峰波长λmin、z大摩尔吸光系数εmax,以及吸收峰的数目、位置、拐点与标准光谱数据*一致,就可以认为是同一种化合物。定性分析的主要目的是知道分析样品中是什么物质。
定量分析和定性分析是分光光度计的两大主要功能,特别是定量分析。其它的分析都应该是从这两大种功能中发展出来的。