仪器网

　　色谱柱是整个色谱系统的核心，色谱柱的质量是高效液相色谱仪分离效果的保障。因此，操作者需要掌握色谱柱的维护方法，在色谱柱的使用过程中，尽量做到以下几点：
 

　　(1)加装保护柱
 

　　保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“垃圾”，同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。保护柱填料应与分析柱一致，粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品，经过一定次数的样品分析(50～100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。
 

　　(2)净化样品
 

　　当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
 

　　(3)避免高压冲击分离柱
 

　　一般色谱柱都能承受得起高压，但经不住突然变化的高压冲击，这将改变柱床体积，影响柱效。引起高压冲击的原因主要有：进样器的样品阀的缓慢转动、泵启动太快、柱切换等操作。用手动进样阀时的压力变化不大，自动进样阀由于切换较慢，可能会造成压力冲击。
 

　　(4)注意分离柱的使用条件
 

　　一般以硅胶为基质的色谱柱使用温度上限不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解，从而使填料性质改变，柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10，但在实际使用时应避免的pH条件，特别是在偏碱性的条件下使用。
 

　　(5)及时冲洗
 

　　试验结束后，要及时用适当的溶剂冲洗系统并过渡到纯甲醇冲洗，对于含有缓冲盐的流动相，较好的办法是先用与分析用流动相组成*相同但不含缓冲盐的溶液进行冲洗，再逐步过渡到纯甲醇冲洗。