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微生物的培养及实验步骤

发布时间:2019/7/11 16:28:55
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  一、 实验原理
 
  大肠杆菌是革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。微生物接种的方法有很多,常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
 
  平板划线法是通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作,将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基的表面。在数次划线后培养,可以分离到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的子细胞群体,这就是菌落。
 
  稀释涂布平板法则是将菌液进行一系列的梯度稀释,然后将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂固体培养基的表面,进行培养。在稀释度足够高的菌液里,聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞,从而能在培养基表面形成单个菌落。
 
  二、实验目的
 
  1、掌握用平板划线法分离纯化大肠杆菌的方法;
 
  2、掌握用稀释涂布平板法分离纯化大肠杆菌的方法。
 
  三、仪器与用具
 
  高压灭菌锅,超净工作台,接种环,培养皿,酒精灯,试管,玻璃涂布器,pH试纸,微量可调移液器,恒温培养箱,大肠杆菌,微生物的实验室培养试剂盒
 
  四、实验准备
 
  称取微生物培养试剂盒中的固体培养基6.4g加入200mL水中,加热充分溶解(可按培养的微生物适合生长条件需要调节pH),121℃高压灭菌20min待用,可倒平板10个。
 
  称取2g液体培养基加100mL蒸馏水溶解,调节pH至7.0,121℃高压灭菌20min,冷却后在超净台接入100μL大肠杆菌菌种,恒温振荡器37℃震荡培养12小时,用灭菌离心管每组分装1mL实验备用
 
  五、实验步骤
 
  1、倒平板操作:
 
  ⑴将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上,右手拿装有培养基的锥形瓶,左手打开封口膜。
 
  ⑵右手拿锥形瓶,使瓶口迅速通过火焰。
 
  ⑶用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,右手将锥形瓶中的培养基(约20mL)倒入培养皿,左手立即盖上培养皿的皿盖。
 
  ⑷等待平板冷却凝固,大约需要5~10min。然后,将平板倒过来放置,使皿盖在下,皿底在上。
 
  2、平板划线操作:
 
  ⑴将接种环放在火焰上灼烧,直到接种环烧红;
 
  ⑵在火焰旁冷却接种环,并打开试管帽;
 
  ⑶将试管口通过火焰;
 
  ⑷将已冷却的接种环深入菌液中,沾取大肠杆菌液。
 
  ⑸将试管口通过火焰,并盖上试管冒。
 
  ⑹左手将皿盖打开一条缝隙,右手将沾有菌种的接种环迅速深入平板内,划三到五条平行线,盖上皿盖。注意不要划破培养基。
 
  ⑺灼烧接种环,待其冷却后,从一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作,在三、四、五区域内划线。注意不要将后一区的划线与一区相连。
 
  3、系列稀释操作:
 
  ⑴将分别盛有9mL水的5支试管灭菌,并按101~105的顺序编号。
 
  ⑵用移液管吸取1mL培养的菌液,注入第二支试管中。吹吸三次或震荡,使菌液与水充分混匀。
 
  ⑶从101倍稀释的试管中吸取1mL稀释液,注入102倍稀释的试管中,重复第2步的操作。依次类推,直到完成后一只试管的稀释。
 
  4、涂布平板操作:
 
  ⑴用火焰灼烧涂布器灭菌,然后冷却8~10s。
 
  ⑵取少量菌液(100μL),滴加到培养基表面。
 
  ⑶用涂布器将菌液均匀地涂布在培养基表面。
 

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