菌种活化培养基的配置
- 发布时间:2019/7/1 14:01:58
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1)菌种试管斜面(活化)培养基及母种扩大培养基
马铃薯琼脂糖培养基:马铃薯(去皮)200 g 、葡萄糖20 g、琼脂15~20g、蒸馏水1000 ml , pH自然。试验用量为1/5。
① 称量 取去皮马铃薯40g,葡萄糖两份,每份2g,琼脂1.5-2.0g。琼脂加入的量取决于琼脂的质量,质量差的应适当增加。
② 将马铃薯切成小块,放入锅中,加水200mL,煮沸30 min。用双层纱布滤去马铃薯残渣,滤液加蒸馏水定容到200mL,搅拌均匀。
③ 取100mL滤液,装入250mL的锥形瓶内,加入2g葡萄糖,搅拌使糖溶解,然后加塞包扎,等待灭菌。该培养基即为酵母菌扩大培养的液体PDA培养基。
④ 将剩余100mL马铃薯滤液放回锅中,加入琼脂,加热熔化。在琼脂熔化的过程中,需要用玻璃棒不断搅拌,并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。
⑤ 加入2g葡萄糖,葡萄糖溶解后,加入适量的水以补充加热过程中损失的水分,定容到100mL。
⑥ 分装 将煮好的培养基分装于试管中,其量为管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角瓶的容量以不超过三角瓶容积之一半为宜。
⑦ 加塞 在管口塞上棉塞。棉塞可过滤空气,防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧ 包扎 加塞后,将试管用线绳捆好,再在棉塞外包一层报纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好。用记号笔注明培养基名称。
⑨ 灭菌 将上述培养基以0.1MPa,121℃,高压蒸汽灭菌20 min。
⑩ 搁置斜面 将灭菌的试管培养基竖直放置,冷至50℃左右(以防斜面上冷凝水太多),将试管口端搁在玻棒或其他合适高度的器具上,搁置的斜面长度以不超过试管总长的一半为宜。
2)进行恒温摇床培养的PDA液体培养基
① 称量 取去皮马铃薯180g,分别称取葡萄糖1g、2g、3g各三份。
② 将马铃薯切成小块,放入锅中,加水900mL,煮沸30 min。用双层纱布滤去马铃薯残渣,滤液加蒸馏水定容到900mL,搅拌均匀。
③ 分装 将煮好的培养基分装于9个锥形瓶中,每支锥形瓶100mL培养基,编号(1)-(9),用记号笔注明置于恒温摇床。
④ 加葡萄糖,利用1mol/L的氢氧化钠溶液或1mol/L的盐酸溶液按照下表调节pH ,并向对应PDA液体培养基(每瓶100mL)中加入相应量的葡萄糖 。
⑤ 加塞 搅拌充分后,在瓶口塞上棉塞。棉塞可过滤空气,防止杂菌侵入并可减缓培养基水分的蒸发。
⑧ 包扎 加塞后,再在棉塞外包一层报纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳扎好。
⑨ 灭菌 将上述培养基以0.1MPa,121℃,高压蒸汽灭菌20 min,冷却待用。