细菌培养检测技术 

概述 

细菌的培养技术是微生物实验中基本技术之一。大多数细菌均可用人工方法培养，只有将细菌  培养出来才能对它进行研究和鉴定。 

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一.培养基的种类 

培养基（culture medium）是细菌生长繁殖所需要的各种营养物质的人工制品。适宜的培养基能使细菌在体外迅速生长繁殖，便于对细菌进行分离和鉴别。可分为基础培养基、营养培养基、选择培养基、鉴别培养基、厌氧菌用培养基和特殊培养基。 

        （一）基础培养基只含有细菌生长所需的基本营养成分，应用广泛，为制备多种培养基的基础，常见的有肉汤培养基、琼脂培养基。 

        （二）营养培养基在基础培养基中加入葡萄糖、血液、血清、腹水或酵母浸膏等有机物，可供营养要求较高的细菌生长需要或增菌用。如结核分枝杆菌培养基中添加鸡蛋、马铃薯、甘油等。 

        （三）选择培养基利用不同种类细菌对化学物质的敏感性不同而制成，使分离菌大量繁殖而抑制其它细菌生长的培养基。培养基中含有的抑制剂能抑制非目的菌生长或使其生长不佳，有利于目的菌的检出和识别。选择培养基多为固体平板，用于从标本中分离某些特定的细菌。 

        （四）鉴别培养基培养基中加有某些特定成分，如糖、醇类和指示剂等，用于检查细菌的各种生化反应，以资鉴别和鉴定细菌。 

        （五）厌氧菌用培养基专性厌氧菌须在无氧条件下才能生长，故需在培养基中加入半胱氨酸、硫乙醇酸钠等还原剂，降低培养基中氧化还原电势，并应与外界空气隔绝，使培养基本身为无氧的环境。 

        （六）特殊培养基为某些需要在特殊条件下才能生长的细菌培养之用。如高渗盐增菌培养基、高渗糖增菌培养基、改良 Kagan氏培养基等。 

二.培养基的制备 

制备一般培养基的主要过程基本相似，包括调配、溶化、调整 pH、过滤、分装、灭菌及检定和保存。 三.细菌检验室的注意事项及无菌技术  细菌培养必须随时为防止污染和病原菌的扩散而进行操作，即无菌操作。

细菌检验室的注意事 项如下： 

        1．细菌的培养应在接种罩或无菌室内进行。有条件的实验室可在超净工作台内进行。 

        2．用接种环分离和移种细菌时，用前用后均需灭菌处理。一般采用火焰灭菌法。 

        3．从培养瓶或试管培养物中取标本或移种时，在打开瓶口、管口或关闭前，均要在火焰上通过 2～3次。切不可将含菌材料污染台面和其他物体。 

        4．如不慎将试管等打破造成菌液污染时，不要惊慌，应立即报告负责人，然后用3％来苏或5％ 石炭酸处理污染台面或地面，至少浸泡30分种。 

        5．工作完毕后，用紫外光灯照射30分钟，或用3％来苏擦拭台面，并清洗双手。 

三、培养法 

根据培养目的和细菌的种类选用适宜的培养方法。常用的有一般培养法、二氧化碳培养法（采用的是二氧化碳培养箱）和 厌氧培养法（采用厌氧培养箱）。 

        （一）一般培养法 一般培养法系指需氧菌或兼性厌氧菌等在需氧条件下的培养方法，故又称需氧培养法。将已接 种好的置37℃孵箱中培养18～24小时。但标本中菌量很少或难于生长的细菌（如结核分技杆菌）需培养3～7天甚至 l个月才能生长。 

        （二）二氧化碳培养法某些细菌的培养，需要5～10%二氧化碳环境中培养才能生长良好。可采用二氧化碳培养箱，它能自动调节二氧化碳的浓度和温度，使用极为方便。传统的方法则采用烛缸法，将培养基放入缸内，点燃蜡烛放在缸中，加盖（涂以凡士林）密闭。因燃烧而产生CO2大约占5～10%，基本可满足细菌培养的要求。 

        （三）厌氧培养法厌氧菌标本的采集及运送有特殊的要求及注意事项，应避免正常菌群的污染，尽量少接触空气并立刻送检。厌氧菌的培养法可大致分为：①物理学方法：遮断空气法（层积法）、 真空法、空气置换法、厌氧罐培养、厌氧袋法、厌氧手套箱等。②化学方法：焦性没食子酸法、硫乙醇酸钠法、黄磷燃烧法。③生物学方法： 需氧菌共生法、燕麦发芽法。④混合法：真空或气体置换与焦性没食子酸法相结合，可根据实际情况选用。