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　　【中国仪器网 使用手册】液相色谱柱的系统由储液器、泵、进样器、色谱柱、检测器、记录仪等几部分组成。储液器中的流动相被高压泵打入系统，样品溶液经进样器进入流动相，被流动相载入色谱柱(固定相)内，由于样品溶液中的各组分在两相中具有不同的分配系数， 在两相中作相对运动时， 经过反复多次的吸附-解吸的分配过程，各组分在移动速度上产生较大的差别，被分离成单个组分依次从柱内流出，通过检测器时，样品浓度被转换成电信号传送到记录仪，数据以图谱形式打印出来。
 

　　加装保护柱
 

　　保护柱的作用是过滤掉来自流动相和样品的化学“垃圾”同时也可以有效除去流动相和样品中的不溶物。尽管现在的色谱仪在流动相吸入口、进样阀后部以及在色谱柱的两端都装有1、2μm等不同孔径的滤器，但滤器只能除去不溶性颗粒而不能除去化学污然，因此，加装保护柱是必要的，特别是在分析中药、中成药等复杂混合物和生物样品时更是保护分析柱*的措施。
 

　　保护柱填料应与分析柱一致，粒径可较分析柱大。保护柱属消耗品，经过一定次数的样品分析(50～100次)后，出现柱压显著升高或峰形变坏或基线漂移时，应考虑更换保护柱。
 

　　过滤流动相和样品
 

　　流动相通常由水或缓冲溶液与有机溶剂混合而成，原则上，所有经过色谱柱的流动相均应过滤，但在实际操作上应视具体情况而有所区别：当有机溶剂用色谱纯级，水用石英亚沸水或其它超纯水时，在能确保水和有机溶剂的质量且没有受到污染时，过滤并无更多实际意义。
 

　　当流动相中含有缓冲盐时，则过滤是必要的，如前所述，当缓冲溶液放置一段时间(视环境温度不同而异，夏季一般不超过48 h，冬季一般不超过一周)后，在使用前还应重新过滤。
 

　　所配制的样品试液在注入流路系统前均要经0. 45μm(0.22μm则更好)孔径滤膜过滤。要注意区分水系和油系，二者不可混用，以防止滤膜溶解而造成污染。装流动相的容器和色谱系统中的在线滤器要定期清洗和更换，以避免滤器因过载而起不到过滤作用。
 

　　净化样品
 

　　当样品中含有对色谱柱有损害的化学成分，如产生*性吸附的蛋白质、糖等有机分子和强吸附性物质，以及可能对柱填料产生破坏作用的基团离子。在进样前应尽可能对样品进行分离提纯以除去多余杂质组分。
 

　　避免过高的柱压
 

　　虽然液相色谱柱能耐受的压力可达6000psi(磅/平方英寸) ，但过高及过大的压力变化均会缩短色谱柱的寿命，避免的方法是
 

　　(1)柱压过高时，尽可能采用较小的流速，以不超过柱大允许压力的一半为宜。
 

　　(2)当流速较大时，应采取流速梯度的办法使流速分步到位。
 

　　(3)使用手动进样阀时，进样阀的切换要尽可能的快。否则超过20%的压力冲击会很快使柱报废。当使用多柱联用时，柱切换要避免在高压下进行。
 

　　注意温度和酸碱度
 

　　一般以硅胶为基质的色谱柱高使用温度不超过60℃，以低于40℃为宜，特别是在流动相pH接近使用限度时，更应降低使用温度。温度过高会加快键合相的水解和硅胶的溶解，从而，使填料性质改变，柱床塌陷，降低柱效，改变峰形。目前的键合硅胶色谱柱标示的pH适用范围可达2～10，但在实际使用时应避免的pH条件，特别是在偏碱性的条件(pH≥8)下使用，如必须要在的pH条件下使用时，可通过以下方法避免柱损害：
 

　　(1)在泵和进样阀之间加装预柱(饱和柱)来饱和流动相；
 

　　(2)降低使用温度；
 

　　(3)检验完毕后立即用与所使用的流动相互相混溶的“温和溶剂”*清洗。
 

　　正确及时的冲洗
 

　　开始试验前，应了解柱中当前是何种溶剂。对于新色谱柱，如无特殊说明均为评价报告中所用流动相。柱中当前溶剂一定要与分析样品所用流动相互溶，如不能混溶，要用与二者均能相互混溶的第三种溶剂过渡。异丙醇是*能与各种溶剂混溶的试剂，可作为中介流动相使用。反相键合硅胶柱适宜的保存环境是纯甲醇，如分析用流动相为缓冲液2有机溶剂，可先用较低甲醇含量(<20%)的甲醇2水置换掉原来的纯甲醇，再进分析用流动相，以防止在柱内发生盐的沉淀；试验结束后，要及时用适当的溶剂冲洗系统并终过渡到纯甲醇冲洗，对于含有缓冲盐的流动相，办法是先用与分析用流动相组成*相同但不含缓冲盐的溶液进行冲洗，再逐步过渡到纯甲醇冲洗。多数报道冲洗液体积大约为柱容积的15～20倍，但终要以基线是否平直、压力是否稳定决定。有些厂家的色谱柱标明了流动相中有机相的低使用浓度为≥5% ，使用时应给予注意。